Comparación de protocolos de conservación de muestras para la obtención de ADN de Sarcocystis aucheniae: Análisis de cantidad y pureza

Abstract

El objetivo del estudio fue comparar la eficiencia de diferentes protocolos de conservación de muestras para la obtención de ADN de Sarcocystis aucheniae, mediante el análisis de su cantidad y pureza. Dichas muestras provinieron de tejido muscular de alpaca. Se emplearon 108 macroquistes de Sarcocystis aucheniae extraídos del músculo cervical de alpaca procedente de la región de Puno. El estudio presentó tres fases de desarrollo: (1) Conservación de las muestras que fueron distribuidas en tres medios de conservación (suero fisiológico 0.9%, etanol al 70% y formol al 10%), a tres tiempos de almacenamiento (24 horas, 15 días y 30 días) y cuatro temperaturas de conservación (4 °C, −20 °C, −80 °C y −196 °C), con tres repeticiones por combinación experimental. (2) La extracción de ADN mediante el uso del protocolo de cola de ratón del kit comercial ReliaPrep™ gDNA Tissue Miniprep System (Promega). (3) Espectrofotometría en NanoDrop™ para medir la cantidad y pureza del ADN extraído. El estudio reportó que los resultados de la cantidad y pureza del ADN variaron dependiendo del medio de conservación y del tiempo de almacenamiento. Se halló diferencia entre grupos (medio-temperatura) que influye significativamente en la cantidad de ADN obtenido, siendo el etanol al 70% el protocolo más eficaz para la conservación de muestras de macroquistes de Sarcocystis aucheniae, ya que permitió obtener ADN con mayor cantidad y pureza especialmente en periodos de almacenamiento prolongados, representando una opción confiable para investigaciones moleculares en parasitología veterinaria.

The objective of this study was to compare the efficiency of different sample preservation protocols for obtaining Sarcocystis aucheniae DNA by analyzing its quantity and purity. The samples were obtained from alpaca muscle tissue. 108 Sarcocystis aucheniae macrocysts were extracted from the cervical muscle of alpacas from the Puno region. The study had three phases. (1) Preservation of the samples, which were distributed among three preservation media (0.9% physiological saline, 70% ethanol, and 10% formalin), at three storage times (24 hours, 15 days, and 30 days), and four storage temperatures (4 °C, −20 °C, −80 °C, and −196 °C), with three replicates per experimental combination. (2) DNA extraction was performed using the mouse tail protocol of the commercial ReliaPrep™ gDNA Tissue Miniprep System kit (Promega). (3) Spectrophotometry was performed using NanoDrop™ to measure the quantity and purity of the extracted DNA. The study reported that the results for DNA quantity and purity varied depending on the preservation medium and storage time. Differences were found between groups (medium-temperature) that significantly influenced the quantity of the DNA obtained, with 70% ethanol being the most effective protocol for preservation of Sarcocystis aucheniae macrocyst samples, as it allowed obtaining DNA with greater quantity and purity, especially during prolonged storage periods, representing a reliable option for molecular research in veterinary parasitology.