Utilidad del PCR para detectar a Campylobacter jejuni directamente de muestras de heces

Abstract

Para facilitar la identificación rápida y especifica de Campylobacter jejuni se desarrolló un Test de Reacción en Cadena de la Polimerasa (PCR) a partir de muestras de heces de niños, con problemas gastrointestinales, menores de 24 meses de edad. Los cebadores (primers) elegidos, CAMPYJ y CAMPYJ2, para la realización del PCR se diseñaron sobre la base de una secuencia específica del gen MapA, este gen codifica a la proteína A (24KD), que es parte estructural de la membrana celular, presente en todas las cepas de Campylobacter jejuni. Para la extracción de ADN directamente de heces se evaluaron 04 protocolos diferentes, mostrando el Método de Franket y col. un ADN genómico más puro y conservado. Para la estandarización del PCR se utilizaron cepas de Campylobacter jejuni, cuyo límite de detección con el par de cebadores fue 15 bacterias, equivalente a 100 fentogramos de ADN de cepa pura de C. jejuni y de 1.5 x10 bacterias, equivalente a 1picogramo de ADN en muestra de heces. Para determinarla sensibilidad y especificidad del PCR se utilizaron 33 muestras de heces positivas y 56 muestras de heces negativas a Campylobacter jejuni; asimismo el PCR no evidenció reacción cruzada con otros enteropatógenos. Determinándose una sensibilidad y especificidad de 88% y 84% respectivamente; resultados que demuestran que el PCR es una buena alternativa de diagnóstico para la rápida detección de Campylobacter jejuni directamente de muestras de heces.

To facilitate the rapid and specific identification of Campylobacter jejuni, a Polymerase Chain Reaction (PCR) test was developed from stool samples of children with gastrointestinal problems under 24 months of age. The primers chosen, CAMPYJ and CAMPYJ2, for PCR were designed on the basis of a specific sequence of the MapA gene, this gene encodes protein A (24KD), which is a structural part of the cell membrane, present in all Campylobacter jejuni strains. For DNA extraction directly from feces, 04 different protocols were evaluated, with the Franket et al. method showing a purer and more conserved genomic DNA. For PCR standardization, Campylobacter jejuni strains were used, whose limit of detection with the primer pair was 15 bacteria, equivalent to 100 phentograms of DNA of pure strain of C. jejuni and 1.5 x10 bacteria, equivalent to 1 picogram of DNA in stool sample. To determine the sensitivity and specificity of the PCR, 33 stool samples positive and 56 stool samples negative for Campylobacter jejuni were used; likewise, the PCR did not show cross-reactivity with other enteropathogens. A sensitivity and specificity of 88% and 84%, respectively, were determined; results that demonstrate that PCR is a good diagnostic alternative for the rapid detection of Campylobacter jejuni directly from stool samples.