Evaluación de un método de extracción de ADN para PCR a partir de láminas de baciloscopia en el diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis-Lima, 2021

Abstract

Antecedentes: La tuberculosis pulmonar continúa siendo una de las enfermedades con alta morbi-mortalidad en nuestro país, por lo cual se requiere el uso de metodologías factibles y de menor tiempo, con este fin surge una diversidad de pruebas, siendo las pruebas moleculares de mayor utilidad debido a su alta sensibilidad y especificidad. Diferentes estudios coinciden en que el método de extracción de ADN incide en la eficiencia de la amplificación que se obtendrá como resultado, por ello, se ha evaluado en el presente estudio una técnica de extracción que permita obtener con facilidad el ADN de Mycobacterium tuberculosis (MTB) a partir de láminas de baciloscopia. Objetivo: Evaluar el rendimiento de un método de extracción de ADN in house para qPCR a partir de láminas de baciloscopia en el diagnóstico de Mycobacterium tuberculosis en Lima, 2021. Material y métodos: Estudio observacional-descriptivo de tipo transversal. Se recolectaron un total de 67 láminas de BK, correspondientes a los años 2019, 2020 y 2021, provenientes del Laboratorio de Mycobacterias del Centro de excelencia (CENEX) en el Hospital Cayetano Heredia; independientemente al estado de carga bacilar, el ADN aislado se utilizó para la identificación de M. tuberculosis mediante qPCR. Resultados: La eficacia del método, se demostró mediante la amplificación total de las 67 extracciones, de las cuales el 86.6% resultaron positivas para M. tuberculosis mediante qPCR. Conclusión: El método de extracción de ADN evaluado a partir de láminas de baciloscopia permitió obtener concentraciones óptimas de ADN para la detección de M. tuberculosis mediante qPCR.

Background: Pulmonary tuberculosis continues to be one of the diseases with high morbidity and mortality in our country, which requires the use of feasible methodologies and less time, with this purpose a variety of tests arises, being the molecular tests of greater utility due to its high sensitivity and specificity. Different studies agree that the DNA extraction method affects the efficiency of the amplification that will be obtained as a result, therefore, different techniques have been evaluated that allow the genetic material of Mycobacterium tuberculosis to be easily obtained. Objective: Evaluate the performance of an in-house DNA extraction method for qPCR from smear slides in the diagnosis of Mycobacterium tuberculosis in Lima, 2021. Material and methods: Cross-sectional observational-descriptive study. A total of 67 sheets of BK were collected, corresponding to the years 2019, 2020, 2021 from the Mycobacteria Laboratory of the Center of Excellence (CENEX); independently of the bacillary load state, the isolated DNA was used for the identification of M. tuberculosis by qPCR. Results: The effectiveness of the method was demonstrated by the total amplification of the 67 extractions, of which 86.6% were positive for M. tuberculosis by qPCR. Conclusion: The DNA extraction method evaluated from sputum smears allowed optimal DNA concentrations to be obtained for the detection of M. tuberculosis by qPCR. Key words: Mycobacterium tuberculosis, Diagnosis, Microscopic stained slides, qPCR.