Modelo ex vivo de respuesta inmune celular Th1 y Th2 en pacientes con hidatidosis por E. granulosus

Abstract

Antecedentes: La infección por Echinococcus granulosus genera en el huésped intermedio una respuesta inmune inicial con predominio Th1 y una fase crónica con polarización Th2 y perfil regulador. En otras helmintiasis se ha descrito que esta modulación puede disminuir la producción de IFN-γ y alterar la respuesta frente a Mycobacterium tuberculosis, afectando pruebas diagnósticas y potencialmente la respuesta vacunal. Se desconoce si estos mecanismos ocurren en la hidatidosis. El presente estudio evaluará ex vivo la respuesta Th1/Th2, citoquinas reguladoras y la proliferación celular en pacientes con y sin hidatidosis, planteando que E. granulosus atenúa la respuesta Th1 frente a antígenos micobacterianos. Objetivo: Comparar la respuesta inmune celular en dos grupos: pacientes sin infección por E. granulosus y pacientes con infección por E. granulosus a través de estimulación de células mononucleares de sangre periférica con BCG y PHA. Se medirán las citoquinas de los perfiles Th1 (IFN-γ), Th2 (IL-4, IL-5) y reguladoras (IL-10, TGF-β1) y la capacidad de proliferación linfocitaria mediante un ensayo con CFSE. Los hallazgos se relacionarán con el tamaño del quiste hidatídico. Materiales y métodos: Estudio experimental de laboratorio. Se determinará la concentración de citoquinas de los perfiles Th1/Th2, citoquinas regulatorias y la capacidad de proliferación linfocitaria en muestras de células mononucleares de sangre periférica en ambos grupos tras ser estimulados con BCG y PHA. Las muestras se obtendrán mediante reclutamiento de pacientes en los servicios de Cirugía General y Cirugía de Tórax y Cardiovascular del Hospital Nacional Cayetano Heredia. El análisis de la citometría de flujo se hará mediante “LEGENDplex™ Data Analysis Software Suite” y “FlowJo™ V10.8”. El análisis estadístico se hará en STATA versión 17.

Background: Infection with Echinococcus granulosus elicits an initial Th1-dominant immune response in the intermediate host, followed by a chronic phase characterized by Th2 polarization and a regulatory immune profile. In other helminth infections, this immunomodulation has been described as decreasing IFN-γ production and altering the immune response to Mycobacterium tuberculosis, thereby affecting diagnostic test performance and potentially vaccine responses. Whether these mechanisms occur in hydatid disease remains unknown. This study will evaluate ex vivo the Th1/Th2 response, regulatory cytokines, and cell proliferation in patients with and without hydatid disease, based on the hypothesis that E. granulosus attenuates the Th1 response to mycobacterial antigens. Objective: To compare the cellular immune response between two groups: patients without E. granulosus infection and patients with E. granulosus infection, through stimulation of peripheral blood mononuclear cells with BCG and PHA. Th1 (IFN-γ), Th2 (IL-4, IL-5), and regulatory (IL-10, TGF-β1) cytokines, as well as lymphocyte proliferative capacity, will be measured using a CFSE assay. The findings will be correlated with hydatid cyst size. Materials and methods: This is an experimental laboratory study. The concentrations of Th1/Th2 cytokines, regulatory cytokines, and lymphocyte proliferative capacity will be determined in peripheral blood mononuclear cell samples from both groups after stimulation with BCG and PHA. Samples will be obtained by recruiting patients from the General Surgery and the Thoracic and Cardiovascular Surgery departments of the Hospital Nacional Cayetano Heredia. Flow cytometry analysis will be performed using LEGENDplex™ Data Analysis Software Suite and FlowJo™ v10.8. Statistical analysis will be conducted using STATA version 17.