Análisis preliminar de la expresión de genes putativos codificantes para el antígeno de superficie del promastigote (PSA) comparando entre estadios de Leishmania (Viannia) peruviana

Abstract

En las regiones tropicales y subtropicales del mundo, las especies del género Leishmania causan una diversidad de enfermedades infecciosas denominadas leishmaniasis. En el Perú, la leishmaniasis cutánea es endémica y es causada principalmente por las especies Leishmania (V.) braziliensis y Leishmania (V.) peruviana. La primera es la más estudiada por ser la principal causante de morbilidad y por el riesgo de progresión a leishmaniasis mucocutánea. Sin embargo, la segunda especie, según estudios de vigilancia pasiva, se presenta con mayor frecuencia en niños menores de 10 años, causando un impacto social y económico negativo, ya que deja cicatrices en las zonas afectadas de los pacientes y porque el tratamiento podría inhabilitarlos de realizar sus funciones diarias. Los estudios de expresión génica en L.(V.) peruviana son muy escasos y siendo una especie originaria del Perú, a pesar de estar aún en debate su estatus taxonómico, es importante reenfocar la atención en su estudio, en especial en aquellos genes codificantes de proteínas candidatas a vacuna tales como las PSA (‘Antígeno de Superficie del Promastigote’). En el presente estudio se analizó la expresión relativa de los genes putativos asociados a la interacción hospedero-parásito PSA5A, PSA9, PSA21 y PSA31A mediante PCR cuantitativo en tiempo real en los estadíos promastigote fase logarítmica y estacionaria de dos cepas de Leishmania (V.) peruviana en bajo repique y cultivadas en medio Schneider modificado con 2% de orina humana. Se incluyó también el estadío amastigote intracelular evaluado a las 72 horas post-infección utilizando macrófagos peritoneales de ratón para la infección. Todos los experimentos fueron realizados con tres réplicas biológicas para evaluar la reproducibilidad de los resultados. A nivel de promastigotes se encontró que los mejores genes de referencia, contrariamente a lo planteado en la hipótesis, fueron los genes PSA31A, PSA5A y PSA21 asociados a la interacción hospedero-parásito. En amastigotes intracelulares no fue posible determinar la expresión relativa de los genes analizados debido a la ausencia de amplificación consistente de estos genes en las réplicas biológicas estudiadas.