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Cisteína proteínasa Fas 1 de Fasciola hepática: caracterización bioquímica, cinética y estructural

Resumen

Las cisteina proteinasas secretadas por el parasito adulto Fasciola hepática son importantes para el desarrollo de la fascioliasis, debido a que están involucradas en mecanismos de evasión del sistema inmune, migración y patogenia. En el presente trabajo se realiza la caracterización cinética, bioquímica y estructural de la proteína Fas1 la cual es una cisteina proteinasa -que muestra actividad fibrinolítica- de aproximadamente 26 kDa -en su forma madura-, presente en los productos de excreción/secreción de F. hepática. La enzima Fas1 presenta una cinética enzimática Michaelis-Menten, con una Km=6.507µM y Vmax=18.33 uM/min, a pH 7 Y 37°C. La enzima tiene un pH óptimo de 5.5 y un punto isoeléctrico de 5.55. La actividad de la proteína Fas1 se inhibió al ser sometida al Dodecil sulfato de sodio debido al probable apantallamiento por éste de los enlaces hidrofóbicos que se forman como parte de la estructura de la proteína. Así mismo, la estructura primaria de Fas1, hallada mediante espectrometría de masas-MALDI-TOF, indica que la enzima es una Catepsina tipo L5 de F. hepática, debido a la homología de sus secuencias. A través del modelamiento in silico de la estructura terciaria de Fas1, se pudo predecir los sitios de unión de la proteína, así como también su ubicación extracelular. Las características aquí descritas, permiten un mejor entendimiento de la proteína Fas1, para el futuro empleo de tecnologías que faciliten su producción y por ende, sea más factible su aplicación.