Efecto del nivel de expresión de la enzima pyrazinamidasa de Mycobacterium tuberculosis en el mecanismo de resistencia a PZA y su interacción con el mecanismo de eflujo de ácido pirazinoico y la actividad enzimática de la pirazinamidasa

Abstract

Mutaciones en el gen pncA, codificante de la enzima pirazinamidasa (PZAsa), es considerado como la principal causa de resistencia a pirazinamida (PZA) en Mycobacterium tuberculosis. Sin embargo recientes estudios sugieren que no hay un sólo mecanismo de resistencia a PZA. La tasa de eflujo de Ácido pirazinoico (POA) es la base de la susceptibilidad a PZA por Wayne, por sus altos valores de sensibilidad y especificidad como predictor de resistencia a PZA. La tasa de eflujo de POA está directamente determinada por la actividad de PZAsa, el nivel de expresión de pncA, y la eficiencia del sistema de bomba de eflujo de POA. Objetivo: El presente estudio analiza la contribución individual y ajustada del nivel de expresión de pncA, actividad de PZAsa, y la eficiencia del sistema de bomba de eflujo de POA sobre la resistencia a PZA en Mycobacterium tuberculosis Métodos: 30 cepas de M. tuberculosis susceptibles a PZA fueron analizados. Para cada cepa se obtuvo PZAsa recombinante y se le midió la actividad enzimática. El nivel de ARNm de pncA fue estimado mediante qRT-PCR, y la tasa de eflujo de POA fue previamente determinada. Las mutaciones en el promotor de pncA fueron encontrados por secuenciamiento de ADN. Para determinar alguna relación sobre el nivel de resistencia a PZA, todos los factores fueron evaluados por análisis de regresión múltiple. Resultados: El bajo nivel de expresión de pncA asociado a mutaciones en el promotor del gen pncA fue observado en cepas silvestres resistentes a PZA. Después de un análisis multivariado de todos los factores asociados a resistencia, la tasa de eflujo de POA fue el mejor predictor seguido por la actividad PZAsa. Estos Página 4 resultados sugieren que las pruebas que se basan en la detección de mutaciones pncA o disminución de la actividad PZAsa son menos predictivas para determinar resistencia a PZA en comparación con las pruebas que miden la tasa de eflujo de POA. Esto debe ser analizado a la luz del desarrollo de ensayos alternativos para determinar la resistencia PZA.