Identificación de aptámeros que reconocen péptidos de Trypanosoma cruzi

Abstract

El Mal de Chagas es una enfermedad infecciosa que genera una gran morbilidad, con aproximadamente 6 millones de infectados mundialmente y 2 millones de personas en riesgo de infección en el Perú. A pesar de que los determinantes clínicos de esta enfermedad han sido muy estudiados, la detección del parásito causante de la enfermedad de Chagas sigue siendo un desafío. En este trabajo se emplearon técnicas bioinformáticas y de evolución in vitro (SELEX) para identificar posibles nuevos biomarcadores y desarrollar aptámeros como nuevos biosensores. Se identificaron diez proteínas altamente expresadas como potenciales biomarcadores, siendo seleccionada como la mejor candidata la proteína codificada por el gen TcCLB.510323.60. Cinco péptidos (Tc1-Tc5) generados a partir de esta proteína se utilizaron para desarrollar aptámeros mediante la técnica de SELEX. Se identificaron secuencias de ADN con un motivo rico en guaninas, de las cuales cinco evidenciaron unión específica con el péptido Tc1. Un ensayo tipo ELISA indicó cualitativamente la capacidad de unión de estas secuencias de ADN al péptido biomarcador y a lisados de cultivos de T. cruzi, confirmándose así su condición de aptámeros. Los aptámeros fueron capaces de unir el péptido TC1 diferencialmente (p<0.05) y mostraron reactividades 2 a 3 veces mayores que el cut-off establecido en lisados (0.071196 para proteína soluble total y 0.082576 para proteína de membrana). Los ensayos con lisados crudos de T. cruzi sugieren la presencia de la proteína codificada por el gen TcCLB.510323.60 en la membrana del parásito. Estos aptámeros podrían ser utilizados para desarrollar un ensayo de detección directa de T. cruzi en muestras biológicas como también para enriquecer muestras con una baja carga parasitaria.