Marcaje con biotina de anticuerpos de dominio único que detectan histonas nativas de Leishmania (V.) braziliensis

Abstract

El sistema de biotina:(estrept-)avidina es uno de los sistemas de marcaje no radioactivos más sensibles utilizados en áreas de biotecnología y biología molecular. Esta tecnología es aplicada en el diseño de ensayos de detección de antígenos mediante la incorporación de biotina a anticuerpos, capaces de reconocer y unirse a un antígeno de interés. En el presente estudio se evaluó el marcaje químico con biotina de dos anticuerpos de dominio único (“sdAbs” por sus siglas en inglés) seleccionados en trabajos previos contra histonas del parásito tripanosomátido Leishmania (Viannia) braziliensis (L. (V.) braziliensis), principal agente etiológico causante de leishmaniasis tegumentaria americana (LTA). Estos sdAbs denominados “S4B1” y “AC10EX” reconocen histonas nativas del parásito L. (V.) braziliensis en ensayos de Western Blot. La incorporación del sistema biotina:(estrept-)avidina en los sdAbs busca reemplazar el sistema de detección clásico basado en dos anticuerpos secundarios por un sistema de detección basado en un conjugado (estreptavidina-HRP). De esta manera, la duración del inmunoensayo y el uso de reactivos son reducidos y el procedimiento experimental es simplificado. En este estudio, se optimizó el marcaje químico con biotina de ambos sdAbs y se evaluó el efecto de la biotinilación en su reconocimiento a histonas de L. (V.) braziliensis y del humano. Los resultados demuestran que el marcaje con biotina del S4B1 modificó su capacidad de detección específica hacia las histonas del parásito, mostrando reacción también hacia las histonas del humano. Por otro lado, el marcaje de AC10EX no alteró su reconocimiento hacia las histonas del parásito y del humano. De modo general, el estudio sugiere que el marcaje químico con biotina de sdAbs puede alterar su interacción con antígenos posiblemente debido a un incremento en hidrofobicidad.