Expresión de la proteína VP1 de sapovirus GI mediante el sistema de baculovirus

Abstract

Antecedentes: Sapovirus es un agente causante de gastroenteritis aguda a nivel mundial. Los Sapovirus humanos se clasifican en cuatro genogrupos (GI, GII, GIV, GV) según la secuencia que codifica la proteína mayor de cápside VP1, siendo el genogrupo GI el causante de la mayoría de brotes o casos esporádicos de gastroenteritis. Debido a la falta de un cultivo celular, la expresión de pseudo-partículas virales en base a la proteína mayor de cápside VP1 ha sido establecida como un método eficaz para el análisis de seroprevalencia y ensayos de inmunogenicidad. El presente estudio tiene como objetivo expresar la proteína VP1 de Sapovirus GI.1 mediante el sistema de baculovirus, por su potencial para desarrollar métodos de diagnóstico inmunológicos y estudios de seroprevalencia en el Perú. Métodos: El gen codificante de la proteína VP1 de Sapovirus GI.1 fue amplificado mediante PCR, sometido a restricción enzimática y ligado en el vector donador PFastBac-HTa. Luego, se transformaron bacterias de Escherichia coli DH10Bac para la transposición del gen VP1 en el genoma de baculovirus (bácmido). El bácmido recombinante purificado fue empleado para la transfección de células Sf9. La expresión de la proteína VP1 se corroboro mediante Western Blot empleando anticuerpos Anti-His. Resultados: Se obtuvo la amplificación del gen VP1, que se clonó en el vector PfastBa-HTa manteniendo el marco de lectura para la expresión de VP1. La transformación en bacterias DH10Bac con el plásmido PfastBa-Hta recombinante condujo a la transposición sitio-especifica del gen VP1 en el genoma de baculovirus. La transfección de células de insecto Sf9 generó partículas recombinantes de baculovirus. El análisis por western blot de recombinantes seleccionadas mostró la presencia de una sola banda proteica compatible con el tamaño de la proteína recombinante VP1.