Detección de mutaciones en rpoB relacionadas a rifampicina-resistencia en aislamientos clínicos de Mycobacterium tuberculosis a través de un ensayo simple y de bajo costo basado en High Resolution Melting Analysis

Abstract

La tuberculosis es la primera causa de muerte por enfermedades infecciosas a nivel mundial. De manera particular, el Perú se encuentra en la lista de los 30 países con mayor índice de multidrogo resistencia en TB. El diagnóstico certero y oportuno de susceptibilidad a drogas es determinante para incrementar las tasas de éxito de tratamiento. La prueba fenotípica basado en cultivo es la prueba estándar, sin embargo, el tiempo de respuesta es prologando. Pruebas moleculares como el Genotype MTBDRplus y el GeneXpert MTB/RIF son opciones de diagnóstico rápido, pero no son de fácil acceso a la población. En este estudio, evaluamos la eficiencia de un ensayo versátil basado en High Resolution Melting (HRM) para la detección de mutaciones en el gen rpoB en aislamientos clínicos de M. tuberculosis resistentes a rifampicina, un marcador de multidrogo-resistencia. En el estudio se incluyó 123 muestras de DNA extraído a partir de aislamientos clínicos resultando en valores de sensibilidad y especificidad de 82.4% y 96.4%, respectivamente, tomando el secuenciamiento como prueba de referencia. Adicionalmente a la extracción de DNA empleando un kit comercial, también se utilizó el método de fenol-cloroformo, manteniendo los valores de sensibilidad, pero incrementando la dispersión de las curvas HRM. A su vez, este estudio plantea un análisis cuantitativo de las curvas de fusión empleando las unidades de fluorescencia relativa máxima para determinar un punto de corte. Considerando ambos tipos de análisis se concluye que el HRM es una prueba robusta, simple y de bajo costo para la detección de mutaciones en rpoB asociadas a RIF-resistencia.