Generación de anticuerpos de dominio único específicos para CD105 humano

Abstract

Los anticuerpos de dominio único o anticuerpos de cadena pesada (HCAbs por sus siglas en inglés Heavy Chain antibodies) son inmunoglobulinas de tipo G que carecen de cadena ligera. Existe un gran interés por la región variable de la cadena pesada (VHH) ya que sus propiedades estructurales y bioquímicas, facilidad de manipulación genética y la afinidad por su antígeno le permiten ser una herramienta biotecnológica de gran alcance. Una de las ramas de la biotecnología que aún no ha implementado el uso de VHH es la ingeniería de tejidos. Esta técnica tiene como finalidad la reparación parcial o completa de un tejido dañado mediante el uso de células, factores de crecimiento y un soporte biodegradable para soportar las células que repararán el tejido. La unión de las células a este soporte es un factor muy importante en la técnica, y la generación de VHH específico a proteínas de membrana, como CD105, podría permitir la fijación de células al soporte de manera muy afín y específica. Para ello, este trabajo ha generado VHH específicos para la proteína de membrana CD105 de humano. Una alpaca fue inmunizada con un lisado celular T24, procedente de un tumor de vejiga que sobre-expresa la proteína CD105. Se produjo una respuesta inmune poli-clonal para el lisado T24 y anti-CD105. A partir de ARN extraído de la sangre del animal, se generó una biblioteca inmune de ADNc de 1.2 x 108 secuencias de VHHs. Mediante la técnica de presentación de fagos, se obtuvo una biblioteca de 2.7 x 107 fagos que expresan VHH anti-CD105. Se evaluaron 46 fagos mediante un ELISA usando CD105 como antígeno y la enzima Pirazinamidasa de Mycobacterium tuberculosis como control negativo, lo que permitió seleccionar y aislar dos fagos que expresan VHH en su cubierta y se unen de manera específica a CD105. La secuencia putativa de VHH específicos para CD105 de ambos fagos fue amplificada y secuenciada.