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Evaluación de dianas multicopias para la detección de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum por LAMP colorimétrico

Resumen

Introducción: El mayor desafío para la eliminación de la malaria es la falta de herramientas para un diagnóstico sensible en el campo. Con esta finalidad desarrollamos y evaluamos pruebas de diagnostico empleando amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP) empleando dianas de múltiples copias y detección colorimétrica para el diagnostico de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum. Métodos: Para la detección de P. vivax se emplearon como dianas el gen mitocondrial citocromo oxidasa I (COX1) y la secuencia no codificante Pvr47, mientras que para la detección de P falciparum se emplearon el gen de la proteína 1 de la membrana eritrocitaria (EMP1) y la secuencia no codificante Pfr364. Los LAMPs se evaluaron con ADN extraído, por kit de columna mini spin y el método de preparación de muestras “Boil & Spin”, de muestras con infecciones detectadas por microscopia (28), submicroscópicas (101) y muestras negativas (183). Resultados: Para la detección de P. vivax, PvCOX1-LAMP mostró mejor rendimiento que Pvr47-LAMP, mientras que el Pfr364-LAMP fue más específico para la detección de P. falciparum. Todas las infecciones microscópicas de P. vivax fueron detectadas por PvCOX1-LAMP usando el método de extracción de ADN del kit de columna mini spin y el 81% se detectaron usando el método “Boil & Spin”. Además, todas las infecciones microscópicas de P. falciparum fueron detectadas por Pfr364-LAMP utilizando ambos métodos de preparación de muestras. En total, PvCOX1-LAMP y Pfr364-LAMP detectaron el 80,2% de las infecciones submicroscópicas utilizando el método de extracción de ADN mediante el kit de columna mini spin, mientras que el 36,6% se detectaron utilizando el método Boil & Spin. Conclusión: Los LAMP colorimétricos COX1 para P. vivax y el Pfr364 para P. falciparum tienen un alto potencial para mejorar el diagnóstico de malaria en el campo detectando un mayor número de infecciones submicroscópicas por Plasmodium.