Dinámica de Producción del Sistema DE3 en Diferentes Chasis

Abstract

E. coli es uno de los microorganismos estelares para la producción de proteínas recombinantes para investigación biológica y clínica o para las industrias. Dentro de esta especie existen dos tipos de cepas que son de las más usadas para la producción de proteínas: las K-12, y las cepas tipo B. Estas cepas presentan diferencias a nivel genoma, proteoma y metaboloma. ¿Son estas diferencias apreciables en cuanto a la dinámica de producción de estas cepas? Por sus diferentes fisiologías se esperaría que sí, y que la carga metabólica de producir proteínas también difiera. Para intentar responder esta pregunta con mayor rigor se evaluó la produccion de GFP mediante el sistema λDE3 en diferentes cepas: MG1655 (K-12), BL21 (B) y BLR (B). Con un lector de placas se midio la densidad óptica y fluorescencia de cultivos de estas bacterias en presencia y ausencia e IPTG para evaluar en tiempo real como es que diferentes cepas producen la misma proteína. Adicionalmente se optó por introducir un plásmido de baja copia con el gen LacI a modo de regulación extra del sistema DE3. Lo que se observo es que en efecto no solo diferentes cepas tienen diferentes dinámicas de expresión sino que el efecto del LacI fue diferente en cada cepa poniendo sobre la mesa la posibilidad de que quizás el metabolismo de carbono propio de estas cepas podría intervenir al momento de producir proteínas recombinantes. Ademas de ello se observó que en todos los casos la tasa máxima de producción de proteínas es similar siendo lo que difiere el tiempo en que esta tasa máxima decae.