La represión de las bombas de eflujo mediada por CRISPRi revela que Rv1258c es un factor clave en la resistencia a la pirazinamida en Mycobacterium tuberculosis

Abstract

La resistencia a pirazinamida (PZA) en tuberculosis (TB) complica su tratamiento. PZA es un profármaco que se convierte en ácido pirazinoico (POA) mediante la enzima pirazinamidasa (PZAsa), codificada por el gen pncA. Aproximadamente el 70% de la resistencia se debe a mutaciones en pncA, mientras que el resto se asocia a otros mecanismos, como las bombas de eflujo que expulsan POA. Se ha reportado que la sobreexpresión de genes como Rv0191, Rv3756c, Rv3008 y Rv1667c, o mutaciones en Rv1258c, aumentan la resistencia a PZA. Este estudio utilizó interferencia por CRISPR (CRISPRi) para reprimir transcripcionalmente cinco genes de bombas de eflujo previamente asociados con la resistencia a la PZA Rv0191, Rv3756c, Rv3008, Rv1667c y Rv1258c. Se realizaron ensayos de Wayne para cuantificar la concentración extracelular de POA en condiciones ácidas, y la prueba TEMA para evaluar la susceptibilidad a PZA. Entre ellos, solo la represión de Rv1258c condujo a una reducción significativa de la expulsión de POA en condiciones ácidas y aumentó la susceptibilidad a la PZA bajo las mismas condiciones. Los demás genes de bombas de eflujo no mostraron un efecto consistente sobre la expulsión de POA ni sobre una variación en la susceptibilidad a PZA, probablemente debido a una represión insuficiente o a la redundancia funcional. Estos hallazgos destacan a Rv1258c como un contribuyente relevante en la expulsión de POA y respaldan el valor potencial de dirigir terapias contra los mecanismos de eflujo para mejorar la eficacia de la PZA.