Publicación: Desarrollo y validación de una prueba rápida en formato Lateral Flow Assay (LFA) para el serodiagnóstico de leishmaniasis cutánea
Portada
PDF 
Citas bibliográficas
Gestores Bibliográficos
Indexadores
Código QR
Autores
Director
Autor corporativo
Recolector de datos
Otros/Desconocido
Director audiovisual
Editor
Tipo de Material
Fecha
Citación
Título de serie/ reporte/ volumen/ colección
Es Parte de
Resumen
En el Perú, la leishmaniasis cutánea (LC) es un problema de salud pública que afecta predominantemente a la población rural socioeconómicamente deprimida.El diagnóstico convencional para esta enfermedad incluye los métodos parasitológico, serológico y molecular, cada uno de los cuales presenta algunas limitaciones. Considerando que el diagnóstico temprano permite un tratamiento oportuno, existe la necesidad de una prueba simple, rápida y precisa con alta sensibilidad y especificidad, que pueda usarse como una alternativa apropiada y aplicable para el diagnóstico de la leishmaniasis cutánea en áreas endémicas con limitado acceso a los servicios de salud. En este estudio se desarrolló y validó una prueba rápida en formato Lateral Flow Assay (LFA) para el serodiagnóstico de leishmaniasis cutánea, que emplea independientemente Antígeno Total Soluble de Leishmania “ATSL” y los oligopéptidos sintéticos opH2A y opLiP2a. En el desarrollo de la prueba rápida; se utilizó un enfoque de unión del oligopéptido biotinilado a estreptavidina como proteína de anclaje que se une a la nitrocelulosa, también se consideró el pH y diferentes matrices sólidas de nitrocelulosa(FF080HP, FF120HP y FF170HP de Whatman/GE). La señal visible se probó con HRP-DAB, nanopartículas de oro coloidal y nanoshell de oro. Las condiciones óptimas se obtuvieron utilizando la membrana de nitrocelulosa FF120HP, con una concentración de 200 μg/mL de estreptavidina y 50 μg/mL de opH2A u opLiP2a;así mismo este ensayo presentó una mejor sensibilidad de detección con nanoshell de oro. En el caso del antígeno total (ATSL) se estableció a una concentración de500 μg/mL en la matriz FF120HP en oro coloidal. Estas condiciones en conjunto para los antígenos (opH2A, opLiP2a y ATSL) aplicadas a la tira LFA, brindaron un resultado a los 40 minutos. En la validación de la prueba LFA, el análisis de la puntuación visual de los antígenos evaluados, mostró un mejor perfil de diagnóstico el oligopéptido opLiP2a que reflejó una sensibilidad de 62.0% y especificidad de 94.6% a comparación del opH2a que tiene una sensibilidad de36.0% y especificidad de 93.5%, e incluso fue mejor que el antígeno total (ATSL)que tiene una sensibilidad de 56.0% y una especificidad de 90.2%; este análisis se confirma cuando se mide por intensidad relativa - porcentaje de positividad. Finalmente, las características diagnosticas de los oligopéptidos (opLiP2a yopH2A) de la prueba LFA son similares a la prueba de ELISA que utiliza los mismos antígenos, corroborando con la prueba de Kappa que dio un acuerdo sustancial entre LFA y ELISA.
Resumen
In Peru, cutaneous leishmaniasis (CL) is a public health problem that predominantly affects the socio economically depressed rural population. Conventional diagnosis for this disease includes parasitological, serological and molecular methods, each of which presents some limitations. Considering that early diagnosis allows timely treatment, there is a need for a simple, rapid and accurate test with high sensitivity and specificity, which can be used as an appropriate and applicable alternative for the diagnosis of cutaneous leishmaniasis in endemic areas with limited access to health services. In this study, a rapid testin Lateral Flow Assay (LFA) format was developed and validated for the serodiagnosis of cutaneous leishmaniasis, which independently uses Total Soluble Leishmania Antigen “ATSL” and the synthetic oligopeptides opH2A and opLiP2a.In the development of the rapid test; An approach was used to bind biotinylatedoligopeptide to streptavidin as an anchor protein that binds to nitrocellulose, the pH and different solid nitrocellulose matrices (FF080HP, FF120HP and FF170HPfrom Whatman/GE) were also determined. The visible signal was tested with HRP-DAB, colloidal gold nanoparticles and gold nanoshell. The optimal conditions were obtained using the FF120HP nitrocellulose membrane, with a concentration of 200 μg/mL of streptavid in and 50 μg/mL of opH2A or opLiP2a;likewise, this assay presented a better detection sensitivity with gold nanoshell. In the case of the total antigen (ATSL), it was developed at a concentration of 500μg/mL in the FF120HP matrix in colloidal gold. These conditions together for the antigens (opH2A, opLiP2a and ATSL) applied to the LFA strip, provided a result after 40 minutes. In the validation of the LFA test, the visual score analysis of the evaluated antigens showed a better diagnostic profile for the opLiP2a oligopeptide, which reflected a sensitivity of 62.0% and specificity of 94.6% compared toopH2a, which has a sensitivity of 36.0 % and specificity of 93.5%, and was even better than the total antigen (ATSL), which has a sensitivity of 56.0% and aspecificity of 90.2%; this analysis is confirmed when measured by relative intensity - percentage of positivity. Finally, the diagnostic characteristics of the oligopeptides (opLiP2a and opH2A) of the LFA test are similar to the ELISA test using the same antigens, corroborating with the Kappa test which gave a substantial agreement between LFA and ELISA.