Construcción de proteína quimérica de proteína verde fluorescente y calpaína 10

Abstract

Las calpaínas son proteasas dependientes de calcio de la familia de las cistein proteasas, cuya participación en enfermedades neurodegenerativas está siendo documentada y estudiada. En nuestro laboratorio se han encontrado evidencias de la interacción entre calpaína 10 y los canales de sodio dependientes de voltaje (NaV). Los canales NaV son elementos clave en el proceso de la señalización neuronal, que inicia con la despolarización de la neurona con la subsecuente activación de canales dependientes de voltaje. La actividad anormal de los NaV ha sido asociada a desórdenes de la excitabilidad y la muerte neuronal. La calpaína 10 es una calpaína atípica que es expresada en el cerebro, entre otros tejidos, la cual ha sido asociada al riesgo de padecer diabetes mellitus tipo 2. En nuestro laboratorio se ha visto también que el ARNm de la calpaína 10 es sobre expresada en neuroblastomas cuando son expuestas a altas concentraciones de glucosa. En conjunto, estos hallazgos sugieren que la calpaína 10 podría jugar un papel en las complicaciones neuropáticas asociadas a la diabetes. Por esta razón, con el fin de caracterizar mejor la interacción entre los canales de sodio y la calpaína 10, así como su posible papel en la neurodegeneración, se construyó un sistema de expresión quimérico de la calpaína 10 en fusión con la proteína verde fluorescente (EGFP), para su expresión heteróloga en células de neuroblastoma de la línea celular N1E-115, lo que emula el incremento en la expresión de calpaina 10 observado en hiperglucemia. El constructo se verificó por secuenciación y la sobre expresión de la calpaína 10 fue verificada por inmunodetección posterior a la transfección de las células de neuroblastoma.