Publicación: Evaluación de medios de cultivo modificados para el desarrollo de un kit microbiológico basado en MODS de Mycobacterium tuberculosis usando un modelo de crecimiento de Mycobacterium smegmatis
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El método de susceptibilidad a drogas por observación microscópica (MODS) ha brindado nuevas oportunidades para la detección rápida, sensible, específica y económica de Mycobacterium tuberculosis. Sin embargo, pocos laboratorios han podido implementar este método, debido principalmente a la complejidad de su preparación. Para responder a esta situación, la industria desarrolló un Kit de MODS con los reactivos en líquido listos para usar, sin éxito alguno y retirándose del mercado por la baja demanda. Uno de los motivos, posiblemente, es el alto costo que demanda mantener la cadena de frío para la conservación de las propiedades del medio líquido, esto incluye el costo de los equipos y su mantenimiento. Por ello, se desea desarrollar un prototipo de kit que incluya medios deshidratados para ser reconstituidos en el momento de su uso y no requieren almacenamiento refrigerado. En este estudio se evaluó el crecimiento de M. smegmatis, como modelo de M. tuberculosis, en el medio líquido Middlebrook 7H9-OADC (7H9-OADC) en dos presentaciones: liofilizado y mezclado, ambos esterilizados con radiación gamma y PANTA. El crecimiento de la micobacteria en estos dos medios fue comparado al crecimiento de la misma en el medio convencional MODS 7H9-OADC (MODS convencional) (control). El medio liofilizado fue preparado a partir del medio 7H9-OADC esterilizado y liofilizado; el medio mezclado fue elaborado mezclando el medio base 7H9 con albúmina, dextrosa y catalasa en su estado natural (7H9-ADC). Ambos medios deshidratados fueron esterilizados eficientemente con radiación gamma y el reactivo PANTA. El reactivo PANTA restringió el crecimiento de M. smegmatis, mientras que la exposición a radiación gamma no mostró efecto adverso en el crecimiento M. smegmatis. Los medios candidatos para la implementación del prototipo de kit de MODS para el diagnóstico de M. tuberculosis son el medio liofilizado, liofilizado con radiación gamma y mezclado con radiación gamma.
Resumen
The Microscopic Observation Drug Susceptibility (MODS) method has provided new opportunities for the rapid, sensitive, specific, and inexpensive detection of Mycobacterium tuberculosis. However, few laboratories have been able to implement this method, mainly due to the complexity of its preparation. To respond to this situation, the industry developed a MODS Kit with ready-to-use liquid reagents, without any success and withdrawing from the market due to low demand. One of the reasons, possibly, is the high cost required to maintain the cold chain for the conservation of the properties of the liquid medium, this includes the cost of the equipment and its maintenance. Therefore, it is desired to develop a prototype kit that includes dehydrated media to be reconstituted at the time of use and does not require refrigerated storage. In this study, the growth of M. smegmatis, as a model of M. tuberculosis, was evaluated in the liquid medium Middlebrook 7H9-OADC (7H9-OADC) in two presentations: lyophilized and mixed, both sterilized with gamma radiation and PANTA. The growth of the mycobacterium in these two media was compared to the growth of the same in the conventional medium MODS 7H9-OADC (conventional MODS). The lyophilized medium was prepared from the sterilized and lyophilized 7H9-OADC medium; The mixed medium was made by mixing the 7H9 base medium with albumin, dextrose and catalase in their natural state (7H9-ADC). Both dehydrated media were efficiently sterilized with gamma radiation and the PANTA reagent. The PANTA reagent restricted the growth of M. smegmatis, while exposure to gamma radiation showed no adverse effect on the growth of M. smegmatis. Candidate media for the implementation of the MODS kit prototype for the diagnosis of M. tuberculosis are lyophilized medium, lyophilized with gamma radiation and mixed with gamma radiation.