Producción de anticuerpos policlonales IgY en gallinas para la detección de antígenos de Trypanosoma cruzi

Abstract

La detección de antígenos de Trypanosoma cruzi en muestras de suero es considerada como una herramienta importante en el diagnóstico de la Enfermedad de Chagas. La producción y el uso de anticuerpo s policlonales pueden contribuir a un aumento de la sensibilidad de las pruebas de inmunodiagnóstico para Chagas. En base a ello, se inmunizaron gallinas con un panel de antígenos proveniente del parásito (TESA, proteínas de membrana y 1 F8) Y se obtuvieron anticuerpos IgY a partir de las yemas de los huevos para que puedan ser usados como herramienta de detección de antígeno circulante en las técnicas de Western Blot y ELISA. Para la extracción de IgYs se probaron dos métodos diferentes: el de cloroformo y el de polietilen glicol (PEG) con modificaciones. Para verificar la respuesta inmune frente a los antígenos correspondientes se utilizó la técnica de inmunofluorescencia indirecta. La determinación de la concentración de proteínas de las muestras se realizo empleando el método de Bradford. La concentración de anticuerpos se realizo empleando un ELISA casero. Los anticuerpos purificados fueron concentrados empleando filtros de Amicon. El método de extracción por cloroformo fue mejor que el método por PEG obteniéndose mayores concentraciones de proteínas, lo que pudo comprobarse con el método de IFI ya que los anticuerpo s obtenidos por el método de cloroformo reconocen estructuras específicas de epimastigotes. Finalmente mediante ELISA se vio un aumento de la respuesta inmune a medida que se iba aumentando el número de inmunizaciones.