Actividad citotóxica y apoptótica de un extracto rico en proantocianidinas de Uncaria tomentosa (UT-PRO) en células mononucleares de sangre periférica (PBMC)

Abstract

Uncaria tomentosa (UT) es antioxidante, antiviral, antimicrobiana y antiinflamatoria, propiedades atribuidas a sus alcaloides; sin embargo, otros compuestos como polifenoles tienen actividad antioxidante y antiinflamatoria. Objetivo: determinar el efecto UT-PRO en el proceso de muerte celular. Consideramos que algunas concentraciones de UT-PRO no inducirán muerte celular. Método: Preparamos UT-PRO (20mg en 40uL de dimetilsulfoxido), luego se diluyó entre 0,25-500ug/mL en RPMI-1640. Se aislaron PBMC (n= 3) mediante gradiente de centrifugación (Hystopaque, d=1,077g/mL), se sembraron 0,5x106 PBMC en una placa de cultivo y se agregaron las UT-PRO. Se incubo durante 24h, 37ºC y 5% CO2. La citotoxicidad se midió por colorimetria en el sobrenadante de cultivo mediante la actividad de la lactato deshidrogenasa (LDH)(Roche,USA). Se determino el IC50 (concentración UT-PRO que elimina al 50% de PBMC). La apoptosis se midió en PBMC (n=1, 0,5x106, ) por citometría de flujo con anexina V y 7-aminoactinomicina (7AAD) (BD FACSCalibur,USA). Se usaron los promedios de cada triplicado ± error estándar de la media (EEM) obtenidos de los donantes sanos. Se utilizó el test-T comparando los promedios contra un control negativo sin UT-PRO con el software GraphPad Prism9. Resultados: El IC50 de citotoxicidad fue de 99,2ug/mL. Se analizó la apoptosis de linfocitos y monocitos (PBMC) encontrandose que la apoptosis temprana aumentó ligeramente en linfocitos tratados con UT-PRO a 0,25 y 2,5ug/mL (p<0,05), se mantuvo a 25 y 100ug/mL (p>0,05) y se redujo a 500ug/mL (p<0,001); sin embargo, a 100-500ug/mL (p<0,05) estarían en apoptosis tardía. En monocitos, la apoptosis temprana disminuye entre 25-500ug/mL (p<0,05) pero a esas concentraciones la apoptosis tardía aumento (p<0,05). Conclusión: UT-PRO es citotóxica a 99,2ug/mL pero empieza a inducir apoptosis a partir de 25ug/mL. Existe una transición de apoptosis temprana a tardía durante las 24 horas de tratamiento. Los efectos biológicos de UT-PRO se observarían por debajo de 25 ug/mL.