Clonamiento y expresión de la proteína tipo tripsina TsAg5 de Taenia solium, con actividad proteolítica, en un sistema de expresión de células de insecto para su potencial uso en el inmunodiagnóstico de cisticercosis porcina

Abstract

La cisticercosis porcina es una enfermedad causada por la ingesta de huevos de Taenia solium y su conversión en oncósferas. Las oncósferas penetran el torrente sanguíneo diseminándose en diversos tejidos. La sintomatología depende del sitio en donde se alojen. Los cerdos afectados muchas veces no muestran sintomatología debido al poco tiempo de vida que tienen antes de su sacrificio, por lo que fácilmente pueden diseminar la enfermedad al actuar como hospederos intermediarios en el ciclo de vida del parásito. El diagnóstico de cisticercosis porcina está basado en la observación de los cisticercos durante la necropsia de las carcasas y a través de la palpación de las larvas en la base de la lengua, estas son pruebas complicadas de hacer debido a que necesitan personal entrenado. Estas pruebas se apoyan de pruebas serológicas como la LL-GP EITB, que tiene moderada sensibilidad (77.37%) y moderada especificidad (76.4%) de diagnóstico, y utiliza un antígeno glicoproteico obtenido de cerdos infectados. Es por esto, que se está buscando proteínas antigénicas que faciliten la detección de anticuerpos utilizando pruebas serológicas y que puedan ser producidas de manera recombinante. TsAg5 ha sido detectada en el fluido de quistes y en antígenos de excreción/secreción de T. solium. TsAg5 expresada en un sistema procariote, sin modificaciones post traduccionales, mostró una sensibilidad moderada para detectar neurocisticercosis y actividad enzimática marginal. En este estudio se expresó TsAg5 en células de insecto, sistema que provee de modificaciones post-traduccionales (ej. glicosilaciones), antigenicidad y correcto plegamiento, generándose proteínas funcionales con actividad enzimática tipo tripsina. Además, se comprobó su antigenicidad con sueros de cerdos con cisticercosis a través de western inmunoblot.

Porcine cysticercosis is a disease caused by the ingestion of Taenia solium eggs and their conversion intro oncospheres. Oncospheres penetrate the bloodstream disseminating in various tissues, The symptomatology depends on the place they deposit. Affected pigs often do not show symptoms due to their short lifespan before slaughter, so they can easily spread the disease by acting as intermediate hosts in the parasite’s life cycle. The diagnosis of porcine cysticercosis is based on the observation of the cysts during the necropsy of pig carcasses and through the palpation of the larvae at the base of the tongue, which are complicated tests to perform because they require trained staff. These tests are supported by serological tests such as immunoelectrotransferblot with affinity to lentil lectin glycoproteins (LL-GP EITB) due to its moderate sensitivity (77.37%) and specificity (76.4%) to diagnose it, however this is a test that depends on infected pigs to obtain the glycoproteic antigen. This is the reason we are looking for proteins that are easy to detect using serological tests and can be produced by modern methodologies such as recombinant techniques. TsAg5 has been detected in cyst fluid and excretion/secretion antigens of T. solium, and has been expressed in a prokaryotic system, without post-translational modifications, which showed a moderate sensitivity for detecting neurocysticercosis and a marginal enzyme activity. In this study, TsAg5 was expressed in insect cells, a system that provides post-translational modifications (e.g., glycosylation), antigenicity and correct folding, generating functional proteins with trypsin-like enzymatic activity. In addition, its antigenicity was verified with pigs’ sera with cysticercosis through western immunoblot.