SELEX para la producción de aptámeros a partir de péptidos de superficie provenientes de proteínas abundantes y secretadas por el quiste de Taenia solium

Abstract

La neurocisticercosis es la causa más común de epilepsia adquirida en adultos en el mundo, y una de las enfermedades zoonóticas más importantes asociadas al sistema nervioso central (SNC). La neurocisticercosis se debe al establecimiento del cisticerco de Taenia solium en el SNC del ser humano, actuando éste como hospedero intermediario accidental. Actualmente, se sabe que varias proteínas, usadas ampliamente en diagnóstico, son secretadas por el cisticerco al líquido cefalorraquídeo y, posteriormente, a la sangre. Varias de estas proteínas se encuentran en mayor abundancia en el secretoma del cisticerco. Aunque existen trabajos en la identificación de anticuerpos monoclonales afines a estas proteínas, existen otras metodologías que no han sido aplicadas aún en la neurocisticercosis. Una de estas tecnologías es el uso de aptámeros que se obtienen mediante la selección evolutiva de enriquecimiento de secuencias de ácidos nucleicos de hebra simple (SELEX). Los aptámeros desarrollan alta afinidad por su blanco gracias a interacciones de naturaleza no covalente como, por ejemplo, puentes de hidrógeno, interacciones iónicas, hidrofóbicas y electroestáticas. En el presente trabajo se planteó adaptar una metodología de SELEX para producir aptámeros contra las proteínas abundantes del cisticerco utilizando péptidos superficiales provenientes de dichas proteínas. Se seleccionaron 14 proteínas como buenos blancos para la producción de aptámeros, siendo estos: la familia de 8KDa (Ts18, Ts14, TsRS1, TsRS2 y Ts8B2), GP50, T24, 14-3-3 (e y z), tioredoxin peroxidasa, trypsin-like protein, catepsina L, immunogenic protein Ts11 y la enolasa. De las dos metodologías de SELEX que se probaron, con la metodología SELEX por transcripción in vitro se pudo producir aptámeros para péptidos superficiales de la proteína Ts18var1 en la ronda 10 del SELEX. Esta producción se evidenció satisfactoriamente con la prueba S1, mientras que con el secuenciamiento de las rondas del SELEX se confirmó el enriquecimiento y se identificaron las secuencias enriquecidas. Dentro del secuenciamiento, el aptámero 1R1 mostró un enriquecimiento de 7300 veces en la población de secuencias. Así mismo, mostró afinidad hacia el péptido pepFH_14 proveniente de la proteína TS18var1. La afinidad fue determinada cuantitativamente mediante titulación y se determinó que fue de 0.4 uM.