Evaluación de tres medios de cultivo alternativos para la detección de Mycobacterium tuberculosis y determinación de la susceptibilidad de fármacos mediante la técnica MODS

Abstract

La tuberculosis resistente a fármacos es un importante problema de salud a nivel global, El ensayo MODS (Microscopic Observation Drug Susceptibility Assay) en un método que usa un cultivo líquido que detecta a M. tuberculosis (MTB) y evalúa la susceptibilidad a isoniazida (INH) y rifampicina (RIF) a partir de muestras de esputo. Una adaptación del ensayo MODS combinado con la prueba Wayne, MODS-Wayne es una prueba fenotípica que evalúa indirectamente la susceptibilidad a pirazinamida (PZA) mediante la detección de ácido pirazinoico, producto enzimático de la pirazinamidasa. La detección de la susceptibilidad a PZA se realiza con MGIT 960 y el ensayo de Wayne, el problema de estas pruebas son su baja confiablidad, dificultad de utilización y el elevado costo. En este estudio evaluamos tres medios de cultivo deshidratados alternativos con el objetivo de obtener medios de fácil preparación reconstituyendo el medio con agua. Los medios deshidratados fueron: (1) medio estéril-liofilizado, (2) medio en polvo mezclado no esterilizada y (3) medio en polvo irradiado. Se evaluó el crecimiento de MTB y la susceptibilidad a los fármacos para INH, RIF y PZA. 282 muestras de esputo con frotis ácido-resistente positivo fueron evaluados. La positividad de la tuberculosis mostró una correlación de 0,925, 0,889 y 0,866 entre cada uno de los tres medios alternativos y el convencional. 47 muestras fueron multirresistentes (MDR) y 24 muestras fueron resistentes a la PZA. Las pruebas de susceptibilidad para MDR y PZA mostraron una excelente concordancia de 1 para MDR y PZA, entre los medios de cultivo alternativos y el estándar de consenso de referencia. El medio mezclado presentó mayor contaminación con respecto al medio convencional. Este análisis demuestra que los medios de cultivo alternativos son apropiados y ventajosos para ser utilizados en el MODS en entornos de bajos recursos.

Drug-resistant tuberculosis is a major global health problem. The MODS (Microscopic Observation Drug Susceptibility Assay) trial is a method that uses a liquid culture that detects M. tuberculosis (MTB) and assesses susceptibility to isoniazid (INH) and rifampicin (RIF) from sputum samples. An adaptation of the MODS assay combined with the Wayne test, the MODS-Wayne test is a phenotypic test that indirectly assesses susceptibility to pyrazinamide (PZA) by detecting pyrazinoic acid, the enzyme product of pyrazinamidase. Detection of susceptibility to PZA is performed with MGIT 960 and Wayne's assay. The problem with these tests is their low reliability, difficulty of use, and high cost. In this study we evaluated three alternative dehydrated culture media with the objective of obtaining media that are easy to prepare by reconstituting the medium with water. The dehydrated media were: (1) sterile-lyophilized medium, (2) non-sterile mixed powdered medium, and (3) irradiated powdered medium. MTB growth and drug susceptibility to INH, RIF, and PZA were assessed. 282 sputum samples with positive acid-fast smears were evaluated. The positivity of tuberculosis showed a connection of 0.925, 0.889 and 0.866 between each of the three alternative means and the conventional one. 47 samples were multidrug resistant (MDR) and 24 samples were resistant to PZA. Susceptibility tests for MDR and PZA showed an excellent agreement of 1 for MDR and PZA, between the alternative culture media and the reference consensus standard. The mixed medium presented higher contamination with respect to the conventional medium. This analysis demonstrates that alternative culture media are appropriate and advantageous for use in MODS in low-resource settings.