Doctorado en Ciencias de la Vidahttps://hdl.handle.net/20.500.12866/9102024-03-19T04:19:44Z2024-03-19T04:19:44ZAnalysis of the expression of circulating microRNAs in an animal model of Alzheimer’s diseaseAquino Ordinola, Ruth Elizabethhttps://hdl.handle.net/20.500.12866/150032024-02-16T16:05:42Z2021-01-01T00:00:00ZAnalysis of the expression of circulating microRNAs in an animal model of Alzheimer’s disease
Aquino Ordinola, Ruth Elizabeth
Entre las enfermedades neurodegenerativas, la enfermedad de Alzheimer (EA) es la forma más común de demencia senil caracterizada en su forma típica por la pérdida inmediata de la memoria y otras capacidades cognitivas asociadas con una disminución gradual de la viabilidad de las células nerviosas y de la actividad de diferentes regiones del cerebro. La enfermedad también se asocia con la acumulación anormal de beta amiloide (Aβ) y proteína Tau en el cerebro. El principal problema de la EA es su detección muy tardía, lo que deja muy poco margen para estrategias terapéuticas. Una mejor comprensión de los mecanismos moleculares de esta patología en modelos animales es fundamental para identificar biomarcadores de diagnósticos mucho más fiables y diseñar terapias eficaces. El análisis de microARNs circulantes ha abierto un campo de exploración para la identificación de biomarcadores vinculados a la desregulación de diversas patologías. Aquí, evaluamos la expresión de microARNs circulantes (miARNs) en un modelo de patología de Alzheimer inducida por infusión en los 2 hemisferios del hipocampo de rata de las formas agregadas del péptido Aβ 1-42. Nuestros resultados revelan que la presencia de este péptido es suficiente para desencadenar una pérdida de actividad cognitiva en ratas, astrogliosis y la alteración de la expresión de 3 miARNs circulantes (miARN-29a, -29c y -146a). Mostramos la cinética de expresión de estos miARNs e informamos diferencias en la expresión de miARN-146a en particular. Finalmente, centramos nuestros estudios en este miARN y estudiamos su papel biológico en cultivos primarios de astrocitos de rata, utilizados como modelo in vitro de la EA. Observamos que, aunque este miRNA146a es capaz de interactuar con sus genes diana transcriptómicos como IRAK1/2 y TRAF-6, el tratamiento de las células con el péptido Aβ 1-42 en su forma oligomérica o fibrilar no conduce a una respuesta inflamatoria. En general, reportamos por primera vez la desregulación de la expresión de microARNs circulantes que puede correlacionarse directamente con la presencia de forma agregada de Aβ 1-42, un componente esencial del empeoramiento crónico de esta patología. También hemos proporcionado datos mecanicistas sobre el papel de miARNA-146 en esta patología. Estos prometedores resultados merecen ser utilizados en estudios a largo plazo, en particular para evaluar su posible aplicación en el diagnóstico clínico de la EA.; Among neurodegenerative diseases, Alzheimer's disease (AD) is the most common form of senile dementia characterized in its typical form by immediate memory loss and other cognitive abilities associated with gradual decline in the viability of nerve cells and the activity of different regions of the brain. The disease is also associated with the abnormal accumulation of amyloid-beta (Aβ) and Tau protein in the brain. The main problem with AD is its very late detection, which leaves very little room for therapeutic strategies. A better understanding of the molecular mechanisms of this pathology in animal models is essential to identify much more reliable diagnostic biomarkers and to design effective therapies. The analysis of circulating microRNAs has opened a field of exploration for the identification of biomarkers linked to the deregulation of various pathologies. Here, we evaluated the expression of circulating microRNAs (miRNAs) in a model of Alzheimer's pathology induced by infusion in the 2 hemispheres of the rat hippocampus of the aggregated forms of the Aβ 1-42 peptide. Our results reveal that the presence of this peptide is sufficient to trigger a loss of cognitive activity in rats, astrogliosis and the disruption of the expression of 3 circulating miRNAs (miRNA-29a, -29c, and -146a). We show the kinetics of expression of these miRNAs and report differences in expression of miRNA- 146a in particular. Finally, we focused our studies on this miRNA and studied its biological role in primary rat astrocyte cultures, used as an in vitro model of AD. We observed that although this miRNA-146a is able to interact with their transcriptomic target genes such as IRAK1/2 and TRAF-6, the treatment of cells with the Aβ 1-42 peptide in its oligomeric or fibrillar form does not lead an inflammatory response. In general, we report for the first time the deregulation of the expression of circulating microRNAs which can be directly correlated with the presence of aggregated form of Aβ 1-42, an essential component of the chronic worsening of this pathology. We have also provided mechanistic data on the role of miARNA-146 in this pathology. These promising results deserve to be used in long-term studies, in particular to assess their potential application in the clinical diagnosis of AD.
2021-01-01T00:00:00ZAmplificación isotérmica mediada por bucle para la detección colorimétrica de blancos multicopias de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparumNolasco Cardenas, Oscar Patriciohttps://hdl.handle.net/20.500.12866/134562023-04-28T13:26:13Z2022-01-01T00:00:00ZAmplificación isotérmica mediada por bucle para la detección colorimétrica de blancos multicopias de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum
Nolasco Cardenas, Oscar Patricio
El diagnóstico temprano y especifico es uno de los principales objetivos en las estrategias para el control de la malaria. El presente estudio evalúa la tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP del inglés Loop-mediated isothermal amplification), validando un sistema comercial y desarrollando un sistema LAMP colorimétrico “in house” empleando secuencias de genes multicopia para la detección de Plasmodium vivax y de Plasmodium falciparum mediante la visualización directa del cambio de coloración del indicador rojo neutro de amarillo a fucsia en las reacciones positivas. Los límites de detección (LOD del inglés Limit of detection) de las pruebas desarrolladas se estimaron entre 2.4 y 3.7 parásitos/μl de sangre. El mejor desempeño para la detección de P. vivax, fue obtenido con el blanco de amplificación COX1, mientras que el diseño con el blanco de amplificación Pfr364 fue el más específico para la detección de P. falciparum. En el diagnóstico para P. vivax y P. falciparum, los resultados empleando sangre entera indican que el LAMP colorimétrico “in house” puede detectar entre el 36,6 y 80.2 % de infecciones submicroscópicas. La máxima capacidad de detección se logró empleando ADN purificado con filtros de sílice; sin embargo, una preparación rápida de la muestra (Hervido y Centrifugado), mostro resultados tan confiables como los obtenidos por microscopía en muestras de sangre entera o sangre impregnada en papel filtro.; Early and specific diagnosis is one of the main objectives in malaria control strategies. The present study assesses Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technology, validating a commercial system and developing an in-house colorimetric LAMP system using multicopy gene sequences to detect Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum with direct visualization of the color change of the neutral red indicator from yellow to fuchsia in the positives reactions. The limits of detection (LOD) of the test developed were estimated to be between 2.4 and 3.7 parasites/μl of blood. The best performance for the P. vivax detection was obtained with the COX1 amplification target, while the design with the Pfr364 amplification target was the most specific for P. falciparum detection. In the P. vivax and P. falciparum diagnosis, the results using whole blood sample indicate that the colorimetric LAMP in-house can detect between 36.6 and 80.2% of submicroscopic infections. The maximum detection capacity of colorimetric LAMP in-house was achieved using purified DNA with silica filter; however, a rapid sample preparation (Boil & Spin) showed result as reliable as those obtained by microscopy in samples of whole blood or blood impregnated on filter paper.
2022-01-01T00:00:00ZEpidemiología molecular de enteropatógenos en microbiomas de humanos, aves y aguas residualesSalvatierra Rodriguez, Guillermo Santoshttps://hdl.handle.net/20.500.12866/133202023-04-13T13:27:50Z2022-01-01T00:00:00ZEpidemiología molecular de enteropatógenos en microbiomas de humanos, aves y aguas residuales
Salvatierra Rodriguez, Guillermo Santos
La resistencia antimicrobiana (RAM) representa una de las mayores amenazas a la salud pública en todo el mundo. Es un problema que no solo afecta la salud humana, sino está relacionado también con la salud animal y ambiental. En este estudio, describimos el papel que cumplen los animales y el medio ambiente en la emergencia de resistencia y como vía de transmisión de enterobacterias resistentes a los seres humanos, utilizando el secuenciamiento del genoma completo y plataformas para análisis bioinformático. En el primer capítulo, describimos cómo la poca regulación del uso de antibióticos en la producción animal puede resultar en un incremento de la emergencia de RAM. Comparamos Escherichia coli de pollos y humanos con diferentes niveles de exposición a la carne de pollo en una comunidad en las afueras del sur de Lima, Perú. Se obtuvieron 315 aislaron de E. coli de humanos (n=150) y pollos (n=165), y siendo estos últimos los que mostraron las tasas más altas de fenotipos resistentes a múltiples antibióticos. El secuenciamiento del genoma completo de 118 aislados identificó filogrupos compartidos entre las poblaciones humana y animal y 604 hits de genes de resistencia, incluido los genes mcr-1, blaCTX-M-55 y blaKPC-3. Nuestros hallazgos sugieren que los aislados de E. coli de los pollos de mercado son una fuente potencial de resistencia que pueden transmitirse a humanos. En el segundo capítulo, se tomaron muestras de agua residuales en ambientes hospitalarios y no hospitalarios en Lima e Iquitos. Un total de 388 enterobacterias fueron obtenidos de aguas residuales en Lima (n=241) e Iquitos (n=147). Se evidenciaron altos niveles de resistencia en los aislados de fuentes intrahospitalarias, sin embargo, también se encontraron niveles altos en los aislados provenientes de ambientes no hospitalarios. Se seleccionó un total de 66 aislados para el secuenciamiento del genoma completo. Genes de resistencia importantes como blaKPC-1, blaCTXM-55 y mcr-1 fueron identificados tanto en enterobacterias de ambientes intrahospitalarios y hospitalarios. El análisis filogenético evidenció clústeres entre fuentes hospitalarias y no hospitalarias. Nuestros resultados sugieren una contribución potencial de fuentes de agua intrahospitalarias en términos de diseminación de bacterias resistentes o genes de resistencia a ambientes no hospitalarios.; Antimicrobial resistance (AMR) represents one of the greatest threats to public health worldwide. It is a problem that affects human health and is related to animal and environmental health. In this study, we describe the role of animals and the environment in the emergence of resistance and as a route of transmission of resistant Enterobacteriaceae to humans, using whole-genome sequencing and platforms for bioinformatics analysis. In the first chapter, we describe how the poorly regulated use of antibiotics in animal production can increase the emergence of AMR. We compared to chicken and human Escherichia coli with different levels of exposure to chicken meat in a community on the southern outskirts of Lima, Peru. 315 E. coli isolates were obtained from humans (n=150) and chickens (n=165), with chickens showing higher rates of multi-antibiotic resistant phenotypes. Whole-genome sequencing of 118 isolates identified shared phylogroups between the human and animal populations and 604 resistance gene hits, including the mcr-1, blaCTX-M-55, and blaKPC-3 genes. Our findings suggest that E. coli isolates from market chickens are a potential source of resistance that can be transmitted to humans. In the second chapter, wastewater samples were taken in the hospital and non-hospital environments in Lima and Iquitos. 388 enterobacteria were obtained from wastewater in Lima (n=241) and Iquitos (n=147). High levels of resistance were found in isolates from hospital sources. However, high levels were also found in isolates from non-hospital environments. A total of 66 isolates were selected for whole-genome sequencing. Essential resistance genes such as blaKPC-1, blaCTXM-55 and mcr-1 were identified in Enterobacteriaceae from both inpatient and hospital environments. The phylogenetic analysis showed clusters between hospital and non-hospital sources. Our results suggest a potential contribution of intrahospital water sources in terms of disseminating resistant bacteria or resistance genes to non-hospital environments.
2022-01-01T00:00:00ZGeneration of a proteomic platform of high processivity for the identification and characterization of recombinant VHHs against CD105Quintana Caceda, Milagros Estherhttps://hdl.handle.net/20.500.12866/131842023-02-27T13:09:01Z2022-01-01T00:00:00ZGeneration of a proteomic platform of high processivity for the identification and characterization of recombinant VHHs against CD105
Quintana Caceda, Milagros Esther
Se obtuvieron diecinueve VHHs (dominios variables únicos de los anticuerpos de cadena pesada) que unen a CD105 (endoglina) humano, un co-receptor endotelial de TFG-β implicado en la regulación de la angiogénesis y el desarrollo de tumores, mediante screening por phage display de una biblioteca de ADNc de VHH obtenida de alpacas inmunizadas con un lisado de una línea celular de cáncer de vejiga que sobreexpresa CD105 (T24). Las secuencias de los VHH se analizaron con ExPASY, GeneDoc y BLAST y mostraron las características estructurales típicas de los VHHs. Ellas se clonaron y expresaron en pET22b(+)/E.coli y los VHHs recombinantes se purificaron por cromatografía de afinidad. Trece VHHs anti-CD105 fueron microarreglados en biochips para determinar la especificidad y afinidad a CD105 unido a membrana celular por SPRi, Los datos de SPRi mostraron que los VHHs unen a las células SC, que sobreexpresan CD105, pero no o poco a las células THP-1, que no lo hacen, demostrando especificidad. Los VHHs se agruparon según su especificidad y aproximación de afinidad por SPRi. Los seis VHHs anti-CD105 mejor clasificados, que se unen con alta especificidad y afinidad a CD105 en solución y unido a membrana celular, pueden utilizarse tanto en estudios de la función de CD105 como en nanosondas para el diagnóstico y la terapéutica de enfermedades en que la angiogénesis desempeña un papel importante.; Nineteen VHHs (single variable domain of heavy chain antibodies) that bind to human CD105 (endoglin), an endothelial co-receptor of TFG-β involved in angiogenesis regulation and tumour development were obtained by phage display screening of a VHH cDNA library raised from alpacas immunised with a lysate of a bladder cancer cell line overexpressing CD105 (T24). The VHH sequences were analysed with ExPASY, GeneDoc and BLAST and showed typical VHH structural features. They were cloned and expressed in pET22b(+)/E.coli and the recombinant VHHs were purified by affinity chromatography. Thirteen anti-CD105 VHHs were microarrayed on biochips to determine specificity and affinity to cell membrane-bound CD105 by SPRi, SPRi data showed that VHHs bind SC cells, which overexpress CD105, but not or little THP-1 cells, which do not, proving specificity. VHHs were grouped according to their specificity and affinity approximation for SPRi. The six top- ranked anti-CD105 VHHs, that bind with high specificity and affinity to CD105 in solution and cell membrane-bound, can be used both in studies of CD105 function and as nanoprobes for the diagnosis and therapeutics of diseases in which angiogenesis plays an important role.; Dix-neuf VHHs (domaines variables uniques d'anticorps à chaîne lourde) qui se lient au CD105 humain (endogline), un co-récepteur endothélial pour TFG-β impliqué dans la régulation de l'angiogenèse et du développement tumoral, ont été obtenus par criblage par l'exposition sur phage d'une bibliothèque d'ADNc de VHH provenant d'alpagas immunisés avec un lysat d'une lignée cellulaire de cancer de la vessie surexprimant CD105 (T24). Les séquences VHH ont été analysées avec ExPASY, GeneDoc et BLAST et ont montré des caractéristiques structurelles typiques des VHHs. Elles ont été clonées et exprimées dans pET22b(+)/E.coli et les VHH recombinants ont été purifiés par chromatographie d'affinité. Treize VHHs anti-CD105 ont été analysés sur des biopuces afin de déterminer la spécificité et l'affinité pour le CD105 lié à la membrane cellulaire par SPRi. Les données SPRi ont montré que les VHH se lient aux cellules SC, qui surexpriment CD105, mais se lient faiblement ou pas du tout aux cellules THP-1, qui ne le font pas, ce qui démontre leur spécificité. Les VHH ont été regroupés en fonction de leur spécificité et de l'approximation de leur affinité par SPRi. Les six VHH anti-CD105 les mieux classés, qui se lient avec une spécificité et une affinité élevées au CD105 en solution et lié à la membrane cellulaire, peuvent être utilisés à la fois dans les études de la fonction du CD105 et comme nanosondes pour le diagnostic et la thérapeutique des maladies dans lesquelles l'angiogenèse joue un rôle important.
2022-01-01T00:00:00ZCaracterización metabolómica de 5 accesiones de ajíes nativos (Capsicum spp.) de una colección peruana como herramienta para la discriminación de las accesiones y la predicción de sus atributos sensorialesEspichan Jauregui, Fabio Franciscohttps://hdl.handle.net/20.500.12866/129622023-01-04T13:26:17Z2020-01-01T00:00:00ZCaracterización metabolómica de 5 accesiones de ajíes nativos (Capsicum spp.) de una colección peruana como herramienta para la discriminación de las accesiones y la predicción de sus atributos sensoriales
Espichan Jauregui, Fabio Francisco
Se ha caracterizado sensorialmente cinco accesiones de ajíes nativos (Ayucllo, Tomatito rojo, Charapita, Miscucho y Dulce rojo cultivados en las localidades de Huaral, Chiclayo y Chincha) con un panel de cata entrenado utilizando 6 descriptores del aroma y 4 descriptores del sabor. Con la data sensorial, se desarrolló un modelo estadístico sensorial que ha permitido clasificar y discriminar a las accesiones de los ajíes nativos. Por otro lado, se determinó el perfil metabolómico de las cinco accesiones de ajíes nativos utilizando técnicas cromatográficas de alto rendimiento (UHPLC-HRMS Orbitrap y GC-MS). También, en base a los perfiles metabolómicos y mediante herramientas estadísticas de análisis multivariado y uso de software especializados, se ha desarrollado un modelo estadístico de huella metabólica que ha permitido la identificación de los biomarcadores putativos que permiten discriminar las accesiones y las especies de genotipos de Capsicum. Utilizando estos resultados se aplicó un novedoso enfoque de análisis multivariado multibloque que ha permitido vincular los metabolitos del sabor (metabolitos no volátiles) y metabolitos del olor (metabolitos volátiles) con los scores del sabor y aroma dados por el panel de cata. De esta manera se han identificado los descriptores químicos o metabolitos que permiten explicar el sabor y aroma de los ajíes nativos.; Five accessions of native peppers (Ayucllo, Tomatito rojo, Charapita, Miscucho and Dulce rojo cultivated in the towns of Huaral, Chiclayo and Chincha) have been sensory characterized with a trained tasting panel using 6 aroma descriptors and 4 flavor descriptors. With the sensory data, a sensory statistical model was developed that has allowed classifying and discriminating the accessions of native peppers. On the other hand, the metabolomic profile of the five accessions of native peppers was determined using high performance chromatographic techniques (UHPLCHRMS Orbitrap and GC-MS). Also, based on metabolomic profiles and through statistical tools of multivariate analysis and use of specialized software, a statistical model of metabolic footprint has been developed that has allowed the identification of putative biomarkers that allow discriminating accessions and genotype species of Capsicum. Using these results, a novel multivariate multiblock analysis approach was applied that allowed us to link taste metabolites (non-volatile metabolites) and odor metabolites (volatile metabolites) with taste and aroma scores given by the tasting panel. In this way, chemical descriptors or metabolites have been identified that explain the taste and aroma of native peppers.
2020-01-01T00:00:00ZCaracterización celular, molecular y metabólica de la pared quística del cisticerco racemoso de Taenia soliumOrrego Solano, Miguel Angelhttps://hdl.handle.net/20.500.12866/128642023-01-05T13:28:47Z2022-01-01T00:00:00ZCaracterización celular, molecular y metabólica de la pared quística del cisticerco racemoso de Taenia solium
Orrego Solano, Miguel Angel
La neurocisticercosis racemosa es una enfermedad agresiva causada por la expansión y proliferación aberrante de la membrana del quiste de Taenia solium dentro del espacio subaracnoideo del cerebro humano causando un efecto masa en el tejido nervioso e inflamación crónica. Considerando que el crecimiento es consecuencia de la proliferación de la pared quística del parásito, no existe evidencia directa reportada que apoye este postulado. Cestodes caracterizados por ser altamente proliferativos presentan un tipo de células totipotentes indiferenciadas denominadas células germinativas y se ha demostrado su participación en el crecimiento y desarrollo de los quistes. Se piensa que las células germinativas serían las responsables del desarrollo y crecimiento anormal del quiste racemoso. En este trabajo, caracterizamos parcialmente la pared quística del cisticerco racemoso de T. solium y demostramos la presencia de células proliferativas, estas células están ausentes en la pared quística del cisticerco vesicular. Las células proliferativas presentan una morfología similar a las células germinativas descritas en otros cestodes y expresan altos niveles de la proteína quinasa tipo polo 1 (plk1). Establecimos un sistema de cultivo in vitro de células proliferativas y demostramos que las células aisladas de quistes racemosos son sensibles a la acción de la hormona insulina. Adicionalmente, evaluamos puntualmente la vía de las proteínas quinasas activadas por mitógenos (MAPK) y demostramos que en los quistes racemosos presentan esta vía activada (fosforilada). Procedimos a evaluar in vitro e in vivo la acción anti-proliferativa de la droga metformina empleando el sistema de cultivo celular y el modelo murino de cisticercosis con Taenia crassiceps. Observamos que la metformina disminuye la proliferación celular reduciendo los niveles de fosforilación de la quinasa regulada por señales extracelulares 1/2 (ERK 1/2). Finalmente, evaluamos el metabolismo del hierro del parásito y observamos en la pared quística del cisticerco racemoso depósitos de hierro. Adicionalmente, los niveles de expresión de dos proteínas de unión a hierro (ferritina y melanotransferrina) y la ribonucleótido reductasa se encuentran sobre-expresados en la forma racemosa. Estos resultados confirman que el quiste racemoso presenta características celulares, moleculares y metabólicas únicas, estrechamente ligadas a la presencia de células germinativas en su pared quística. Las células germinativas constituyen un novedoso blanco terapéutico que puede permitir la evaluación de nuevos fármacos para el tratamiento de la neurocisticercosis racemosa.; Racemose neurocysticercosis is an aggressive disease caused by the aberrant expansion of the cyst form of Taenia solium within the subarachnoid space of the human brain and spinal cord resulting in a mass effect and chronic inflammation. Although expansion is likely caused by the proliferation and growth of the parasite bladder wall, there is little direct evidence of the mechanisms that underlie these processes. Studies in highly proliferative cestodes demonstrate the participation of undifferentiated totipotent cells called germinative cells in the growth and development of cysts. Germinative cells would be responsible for the abnormal growth and development of the racemose cyst. In this work, we partially characterize the bladder wall of the racemose cyst of T. solium and demonstrate the presence of proliferative cells. These cells are absent in the bladder wall of the vesicular cyst. Proliferative cells present morphology similar to germinative cells described in other cestodes and express high levels of polo like kinase 1 (plk1). We established an in vitro culture system of proliferative cells and demonstrated that cells isolated from racemose cysts are sensitive to the action of the hormone insulin. In addition, we evaluated the mitogen-activated protein kinase (MAPK) signaling pathway and demonstrated that the racemose cysts have active (phosphorylated) this pathway. We proceeded to evaluated in vitro and in vivo the anti-proliferative action of the drug metformin using the cell culture system and the murine model of cysticercosis with Taenia crassiceps. We observed that metformin decreases cell proliferation by reducing the phosphorylation levels of extracellular signal-regulated kinase 1/2 (ERK 1/2). Finally, we evaluated the iron metabolism of the parasite and observed iron deposits in the bladder wall of the racemose cyst. Additionally, the expression levels of two iron-binding proteins (ferritin and melanotransferrin) are overexpressed in the racemose form. These results confirm that the racemose presents unique cellular, molecular and metabolic characteristics, closely linked to the presence of germinative cells in the bladder wall. Germinative cells constitute a novel therapeutic target that may allow the evaluation of new drugs for the treatment of racemose neurocysticercosis.
2022-01-01T00:00:00ZMecanismos de coexistencia de dos especies simpátricas de lobos marinos, Arctocephalus australis y Otaria byronia, en Punta San Juan, PerúCárdenas Alayza, Susanahttps://hdl.handle.net/20.500.12866/116442022-05-11T21:17:26Z2021-01-01T00:00:00ZMecanismos de coexistencia de dos especies simpátricas de lobos marinos, Arctocephalus australis y Otaria byronia, en Punta San Juan, Perú
Cárdenas Alayza, Susana
El principio de exclusión competitiva predice que las especies mostrarán mecanismos de segregación para coexistir. En el Sistema de la Corriente de Humboldt (HCS) en Perú, los lobos marinos chuscos (SASL, Otaria byronia) coexisten con lobos marinos finos (SAFS, Arctocephalus australis). Sin embargo, la segregación trófica, temporal y espacial durante la búsqueda de alimento no está claramente definida. El presente estudio describe y compara los nichos ecológicos de las dos especies para determinar si existe diferenciación / sobreposición interespecífica e intraespecífica de nichos. Este estudio se desarrolla en Punta San Juan (PSJ) en Perú, donde se reproducen ambas especies. Las trayectorias poblacionales demuestran que ambas poblaciones se encuentran en un estado de declive. Una reducción en juveniles sugiere que una limitación de recursos explica el declive actual (Capítulo 1). Se detectó la segregación alimentaria interespecífica según tipo de presa. Sin embargo, también se encontró un solapamiento trófico durante un El Niño, lo cual sugiere que los eventos climáticos pueden exacerbar la competencia (Capítulo 2). Un análisis de locaciones en el mar determinó que los machos se segregan en el espacio y tiempo; mientras que las hembras se traslapan en el espacio pero tienen mecanismos de segregación temporal. Las variables ambientales asociadas a hembras sugieren afinidad al hábitat pelágico en SAFS y costero en SASL. Mientras que, los machos presentan mayor variabilidad interindividual, que aún falta explorar (Capítulo 3). Finalmente, se investigó la segregación de nicho a largo plazo en las firmas isotópicas en las vibrisas de SAFS y SASL. En general, los otáridos ampliaron sus nichos tróficos como respuesta al aumento del nivel del mar y a temperaturas oceanográficas más cálidas. La disminución general en la señal de δ15N sugiere un empobrecimiento en la base de la red trófica, con efectos bottom-up (Capítulo 4). Juntos, estos resultados ayudan a explicar el declive poblacional actual, y sirven para extender recomendaciones de conservación para las poblaciones de otáridos en HCS.; The principle of competitive exclusion predicts that species will exhibit segregation mechanisms to coexist. In the Humboldt Current System (HCS) in Peru, sea lions (SASL, Otaria byronia) coexist with fur seals (SAFS, Arctocephalus australis). However, trophic, temporal and spatial segregation during foraging is not clearly understood. The present study describes and compares the ecological niches of the two species to determine if there is interspecific and intraspecific niche differentiation/overlap. This study is conducted at Punta San Juan (PSJ) in Peru, where both species breed. Population trajectories show that both populations are in a state of decline. A reduction in juveniles suggests that resource limitation explains the current decline (Chapter 1). Interspecific feeding segregation according to prey type was detected. However, trophic overlap was also found during an El Niño, suggesting that climatic events may exacerbate competition (Chapter 2). An analysis of at-sea locations determined that males segregate in space and time; whereas females overlap in space but have temporal segregation mechanisms. Environmental variables associated with females suggest an affinity for pelagic habitat in SAFS and coastal habitat in SASL. Males, on the other hand, show greater inter-individual variability, which remains to be explored (Chapter 3). Finally, long-term niche segregation in isotopic signatures was investigated in SAFS and SASL vibrissae. In general, otariids expanded their trophic niches in response to sea level rise and warmer oceanographic temperatures. The overall decrease in the δ15N signal suggests an impoverishment at the base of the food web, with bottom-up effects (Chapter 4). Together, these results help to explain the current population decline, and serve to extend conservation recommendations for otariid populations in HCS.; Le principe d'exclusion compétitive prédit que les espèces feront preuve de mécanismes de ségrégation pour coexister. Dans le système du courant de Humboldt (HCS) au Pérou, les lions de mer sud-américains (SASL, Otaria byronia) coexistent avec les otaries à fourrure sud-américaines (SAFS, Arctocephalus australis). Cependant, la ségrégation trophique, temporelle et spatiale pendant la recherche de nourriture reste largement inconnu. La présente étude décrit et compare les niches écologiques des deux espèces afin de déterminer s'il existe une différenciation/un chevauchement des niches interspécifiques et intraspécifiques. Cette étude se déroule à Punta San Juan (PSJ) au Pérou, où les deux espèces se reproduisent. Les trajectoires des populations montrent que les deux populations sont en état de déclin. Une réduction des juvéniles suggère que la limitation des ressources explique le déclin actuel (Chapitre 1). Une ségrégation alimentaire interspécifique en fonction du type de proie a été détectée. Cependant, un chevauchement trophique a également été constaté lors d'un El Niño, ce qui suggère que les événements climatiques peuvent exacerber la compétition (Chapitre 2). Une analyse des localisations en mer a permis de déterminer que les mâles se séparent dans l'espace et dans le temps, tandis que les femelles se chevauchent dans l'espace mais disposent de mécanismes de ségrégation temporelle. Les variables environnementales associées aux femelles suggèrent une affinité pour l'habitat pélagique chez les SAFS et l'habitat côtier chez les SASL. Les mâles, en revanche, présentent une plus grande variabilité interindividuelle, qui reste à explorer (Chapitre 3). Enfin, la ségrégation de niche à long terme dans les signatures isotopiques a été étudiée dans les vibrisses SAFS et SASL. En général, les otariidés ont étendu leurs niches trophiques en réponse à l'élévation du niveau de la mer et au réchauffement des températures océanographiques. La diminution globale du signal δ15N suggère un appauvrissement à la base du réseau alimentaire, avec des effets bottom-up (Chapitre 4). Ces résultats aident à expliquer le déclin actuel de la population, et servent à étendre les recommandations de conservation pour les populations d'otariidés dans le HCS.
2021-01-01T00:00:00ZEvaluación de la seguridad del agua en 2 comunidades Shawi de la Amazonía peruanaTorres Slimming, Paola Alejandrahttps://hdl.handle.net/20.500.12866/115502022-08-15T17:06:00Z2021-01-01T00:00:00ZEvaluación de la seguridad del agua en 2 comunidades Shawi de la Amazonía peruana
Torres Slimming, Paola Alejandra
Introducción: El enfoque de seguridad del agua (hídrica) ha ganado validez en los últimos años al tratar de comprender cómo las diferentes dimensiones del agua pueden afectar la salud y los estilos de vida en las personas. Las dimensiones de la seguridad del agua abarcan el acceso a una fuente de agua segura, el uso de las fuentes de agua para las actividades diarias y económicas, agua adecuada para beber, saneamiento e higiene (WASH). Como tal, el uso del agua perfila la dinámica en relación con la vida de las personas ya sea fortaleciendo la resiliencia o profundizando las vulnerabilidades dentro de las culturas y las sociedades. Como ejemplo, las poblaciones indígenas a nivel global tienen mayor riesgo de sufrir inseguridad hídrica y representan una prioridad en el logro de las metas en los objetivos de desarrollo sostenible (ODS). Objetivos: El objetivo principal de esta tesis fue caracterizar, a través de las observaciones de los participantes shawi, el estado actual de la seguridad hídrica y los impactos en los estilos de vida de las comunidades indígenas shawi a lo largo de la cuenca del río Armanayacu, en Perú. Métodos: Se construyó un estudio de caso a partir de dos estudios exploratorios concurrentes de métodos mixtos, bajo el enfoque de EcoSalud. Las comunidades indígenas incluidas en este estudio pertenecen a la etnia Shawi y son las que se asociaron con el programa IHACC. Todas las comunidades se encuentran en la misma zona del distrito de Balsapuerto, provincia de Alto Amazonas, departamento de Loreto. La información fue recolectada de dos comunidades shawi elegidas por conveniencia durante 2015. El estudio siguió pautas éticas para la investigación con pueblos indígenas. Resultados: Los resultados generales recopilados de ambos estudios de métodos mixtos proporcionan un panorama relacionado con la inseguridad hídrica en el área. Estas comunidades tienen una puntuación baja en relación con indicadores de agua, el saneamiento y la higiene (WASH) respecto a los ODS. Además, variaciones en factores climáticos están afectando la dinámica en los sistemas de agua shawi, y a su vez estos factores climáticos se están viendo afectadas por otros factores no climáticos, como la deforestación. Conclusiones: La presente tesis presenta información muy importante acerca de la inseguridad del agua en dos comunidades shawi, poblaciones vulnerables que merece ser priorizadas. Asimismo, puede ayudar a abordar adecuadamente esta problemática en relación con los retos futuros que suponen los ODS.; Introduction: Water security research is critical to understand how livelihoods and health can be affected by different water dimensions. Water dimensions encompass access to a safe water source, the use of the water source for daily and economic activities, and adequate water for safe drinking, sanitation and hygiene (WASH). As such, water shapes dynamics around peoples’ lives either by strengthening resiliency or deepening vulnerabilities within their cultures and societies. As an example, Indigenous Peoples around the globe are often at higher risk of water insecurity and are a priority to accomplish the Sustainable Development Goals (SDG). Objectives: This dissertation research characterized, through Shawi observations, the current state of water security and impacts on livelihoods in Indigenous Shawi communities along the Armanayacu river basin, in Peru. Methods: A case study was constructed from two exploratory concurrent mixed-methods studies that were guided by an EcoHealth framework. The Indigenous communities partnered in this study belong to the Shawi Ethnia. Two communities, chose by convenience, are both in the same area of Balsapuerto district, province of Alto Amazonas, department of Loreto. Data collection was done using surveys, interviews, PhotoVoice, focus groups and walking paths in two communities during 2015. This study followed ethical principles under Indigenous Peoples guidelines for research. Results: Overall results collected from both mixed-methods studies illustrate a landscape of water insecurity in the area. These communities underscore for the SDG in water, sanitation and hygiene (WASH) outcomes. Additionally, climatic factors are affecting Shawi’s water systems and livelihoods. Meanwhile, non-climatic factors as deforestation aggravate climatic factors in the Shawi area. Conclusions: This thesis dissertation documents important information about water insecurity in two Shawi communities with ongoing challenges related to WASH, and climatic and non-climatic drivers which need to be considered in addressing and complying future challenges in SDG.; Introduction: L’accent mis sur la sécurité hydrique s’est vu renforcé ces dernières années lorsqu’il s’est agi de comprendre comment les différentes orientations de la gestion de l’eau peuvent affecter la santé et la façon de vivre des personnes. Les paramètres relatifs à la salubrité de l'eau englobent l'accès à une source d'eau potable, l'utilisation de sources d'eau pour les activités quotidiennes et économiques, et une eau potable et de qualité pour la consommation, l'assainissement et l'hygiène (WASH). L’usage qui est fait de l’eau, comme telle, définit la dynamique de la vie des peuples soit en renforçant leur résilience ou en accentuant la vulnérabilité de leurs cultures et de leurs sociétés. Les peuples autochtones du monde entier, par exemple, sont souvent plus exposés à l'insécurité hydrique et constituent une priorité lorsqu’il est question d’atteindre les objectifs de développement durable (ODD). Objectifs: l’objectif principal de cette thèse, consiste, grâce aux observations menées chez les Shawi, à caractériser l'état actuel de la sécurité hydrique et les impacts qu’elle produit sur la façon de vivre des communautés autochtones Shawi le long du bassin de la rivière Armanayacu, au Pérou. Méthodes: Une étude de cas a été élaborée à partir de deux études exploratoires mixtes, concurrentes, sous l’angle de l’EcoSanté. Les deux communautés autochtones préalablement choisies en 2015, sont situées dans la même zone du district de Balsapuerto, dans la province de l'Alto Amazonas (Loreto); elles appartiennent à l’ethnie Shawi et font partie du programme IHACC. La collecte de données qui se fonde sur des entretiens et des groupes de discussion s’est déroulée dans le respect et les principes éthiques dus à toute recherche portant sur les peuples autochtones. Résultats: Les résultats globaux recueillis à partir des deux études reposant sur des méthodes mixtes montrent un paysage régional marqué par l’insécurité hydrique. Les indicateurs d’eau, d'assainissement et d'hygiène (WASH) révèlent des scores très faibles dans les deux communautés si on les compare aux ODD. Par ailleurs, les variations climatiques affectent le bon fonctionnement des systèmes d’eau Shawi; ces mêmes variations climatiques, à leur tour, sont altérées par des facteurs non climatiques, tels que la déforestation. Conclusions: Cette thèse fournit des informations importantes sur le caractère insalubre de l’eau au sein de deux communautés shawi; population vulnérable dont les besoins doivent être traités en priorité. Une réflexion sur une approche appropriée des défis futurs suscités par les ODD se doit d’être menée.
2021-01-01T00:00:00ZDevelopment of a test associated with magnetic nanoparticles for the diagnosis of tuberculosisLeón Janampa, Nancyhttps://hdl.handle.net/20.500.12866/81352021-03-27T02:15:46Z2019-01-01T00:00:00ZDevelopment of a test associated with magnetic nanoparticles for the diagnosis of tuberculosis
León Janampa, Nancy
Mycobacterium tuberculosis causes one of the diseases with the highest mortality and morbidity rate in the Americas and around the world. In developing countries, the diagnosis of tuberculosis (TB) is based on smear microscopy and bacteriological cultures. The first method has low sensitivity, and the second take several weeks to reach a confirmatory diagnosis. The lack of a rapid diagnosis compromises the efforts to control TB, favoring its transmission to the susceptible population. Currently, magnetic nanoparticles (MNPs) functionalized with biomolecules have been used in biomedicine, due the magnetic, electrical and optical properties. In this way, applying external magnetic fields, biofunctionalized MNPs are used to detect and concentrate cells and biomolecules from biological samples. In this work we present the synthesis, characterization and bio-functionalization of magnetic nanoparticles to develop a sandwich ELISA assay using MNPs to detect antigens from M. tuberculosis. For this purpose, magnetic nanoparticles were synthesized by the coprecipitation method. The MNP surface was amine-silanized (MNP@Si@NH2) and characterized by physical and chemical methods. The MTB antigens evaluated in this study were: Hsp16.3, CFP10, ESAT6, MTC28, MPT64, 38 kDa protein, Ag85B and MoeX. Cloning and expression of recombinant proteins were expressed in E. coli BL21 (DE3) pLysS system. Polyclonal antibodies were produced in New Zealand rabbits and BALB/C mice, previously immunized with purified recombinant antigens. Specific antibodies (ab) were immobilized in the amine-silanized MNP surfaces (MNP@Si@ab). The MNP@Si@ab were used in a colorimetric sandwich ELISA assay to capture and detect native MTB antigens from sputum samples. The XRD, Mössbauer spectroscopy, zeta potential, TEM and FTIR demonstrated the successful preparation of the MNPs showing a diffraction crystal diameter of ~12.5 nm (10.48 ± 2.56 nm), superficial net charge of ᶎ: +23.57 ± 2.87 mV, characteristic patterns of magnetite and a spherical structure. Additionally, a magnetization saturation of 37.06 emu.g-1 was observed. For the functionalization of nanoparticle surfaces with antibodies, an active ester method was used for peptide bond formation. Parameters such as time of incubation, concentration of coupling agents and surface saturation level of aminesilanized MNPs (MNP@Si@NH2) were standardized. Finally, antibody functionalized on MNPs were used to capture and detect recombinant and native M. tuberculosis antigens in an ELISA-MNP@Si@ab sandwich test in a reaction time <4 h. The ESAT6 and CFP10 antigens were better discriminated in sputum pooles from patients with TB (fold value ~ 1.8). The use of MNP@Si@ab improved the detection of MTB antigens in biological samples with respect to conventional sELISA. Our results are encouraging, but the essay requires additional evaluations such as determining cross-reactions with sputum samples from patients with other infections, performing the test with fresh sputum of TB patients, and determining the clinical sensitivity and specificity of the method.; Mycobacterium tuberculosis causa una de las enfermedades con la tasa más alta de mortalidad y morbilidad en las Américas y en todo el mundo. En países en vías de desarrollo, el diagnóstico de tuberculosis (TB) se basa en microscopía de frotis y cultivos bacteriológicos. El primer método tiene baja sensibilidad y el segundo toma varias semanas para llegar a un diagnóstico confirmatorio. La falta de un diagnóstico rápido compromete los esfuerzos para controlar la TB, lo que favorece su transmisión a la población susceptible. Actualmente, las nanopartículas magnéticas (MNP) funcionalizadas con biomoléculas se han utilizado en biomedicina, debido a las propiedades magnéticas, eléctricas y ópticas. De esta manera, aplicando campos magnéticos externos, se utilizan MNP bio-funcionalizadas para detectar y concentrar células y biomoléculas a partir de muestras biológicas. En este trabajo presentamos la síntesis, caracterización y bio-funcionalización de las nanopartículas magnéticas para desarrollar un ensayo ELISA sándwich usando MNPs para detectar antígenos de M. tuberculosis. Para este propósito, las nanopartículas magnéticas fueron sintetizadas por el método de co-precipitación. La superficie de MNP fue aminosilanizada (MNP@Si@NH2) y se caracterizada por métodos físico y químicos. Los antígenos de MTB evaluados en este estudio fueron: Hsp16.3, CFP10, ESAT6, MTC28, MPT64, proteína de 38 kDa, Ag85B y MoeX. La clonación y la expresión de las proteínas recombinantes se realizaron en el sistema de E. coli BL21 (DE3) pLysS. Se produjeron anticuerpos policlonales en conejos de Nueva Zelanda y ratones BALB/C, inmunizados previamente con antígenos recombinantes purificados. Se inmovilizaron anticuerpos específicos (ab) en las superficies de MNP amino-silanizadas (MNP@Si@ab). El MNP@Si@ab fue utilizado en un ensayo ELISA sándwich colorimétrico para capturar y detectar antígenos de MTB nativos en muestras de esputo. La XRD, espectroscopia de Mössbauer, la potencial zeta, TEM y FTIR demostraron la preparación exitosa de los MNP, el cual mostró un diámetro de difracción del cristal de ~ 12.5 nm (10.48 ± 2.56 nm), carga neta superficial de ᶎ: +23.57 ± 2.87 mV, patrones característicos de magnetita y una estructura esférica. Además, una saturación de magnetización de 37.06 emu.g-1 fue observada. Para la funcionalización de superficies de nanopartículas con anticuerpos, se utilizó el método del éster activo para la formación de enlaces peptídicos. Parámetros tales como el tiempo de incubación, la concentración de los agentes de acoplamiento y el nivel de saturación de la superficie de las MNPs aminosilanizadas (MNP@Si@NH2) fueron estandarizadas. Finalmente, se usaron MNP funcionalizados con anticuerpos para capturar y detectar antígenos nativos y recombinantes de M. tuberculosis en una prueba sándwich de ELISAMNP@ Si@ab en un tiempo de reacción <4 h. Los antígenos ESAT6 y CFP10 se discriminaron mejor en las muestras de esputo de los pacientes con TB (fold value ~ 1,8). El uso de MNP@Si@ab mejoró la detección de antígenos de MTB en muestras biológicas con respecto a un sELISA convencional. Nuestros resultados son alentadores, pero el ensayo requiere evaluaciones adicionales, como determinar reacciones cruzadas con muestras de esputo de pacientes con otras infecciones, realizar la prueba con esputo frescos de pacientes con TB y determinar la sensibilidad y especificidad clînica del método.
2019-01-01T00:00:00ZEstudio de la simbiosis rizobiana y micorrízica en el mejoramiento de la producción de tara (Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze)Sangay Tucto, Sheena Yulianahttps://hdl.handle.net/20.500.12866/72382021-03-27T02:15:28Z2018-01-01T00:00:00ZEstudio de la simbiosis rizobiana y micorrízica en el mejoramiento de la producción de tara (Caesalpinia spinosa (Molina) Kuntze)
Sangay Tucto, Sheena Yuliana
La tara (Caesalpinia spinosa) es una especie leguminosa forestal de gran importancia por su alta demanda en el mercado internacional para el uso de sus taninos presentes en sus vainas y de sus gomas provenientes de sus semillas. A pesar de su gran importancia para el país, la mayor parte de la producción proviene de bosques naturales no manejados. Estos bosques presentan problemas de nutrición, que por lo general son debidos a la carencia de minerales en el suelo (particularmente en fósforo y en nitrógeno), y a un limitado almacenamiento del agua. En suelos pobres, los micro-organismos pueden ser aliados preciosos dado que aumentan la asimilación de agua y nutrientes para las plantas. La valorización de los microorganismos presentes en el suelo, como es el caso de las micorrizas y las bacterias, representa una estrategia alternativa sostenible para la mejora de la fertilidad del mismo y el manejo forestal en general. De un lado, las micorrizas consisten en la asociación simbiótica entre un hongo benéfico y las raíces de una planta hospedera, logrando una mayor superficie radicular de la planta y como consecuencia una mejor captación de agua y nutrientes necesarios para su desarrollo. De otro lado, las bacterias del género Rhizobium que viven en simbiosis con la mayoría de las leguminosas podrían permitir un aporte de nitrógeno adicional que la tara necesita para su crecimiento. Además, según diferentes estudios ambos componentes del suelo, han demostrado ser una alternativa a la reducción del uso de fertilizantes químicos para diversos cultivos. En la presente investigación de tesis doctoral, se buscó estudiar la diversidad de hongos asociados a las raíces de los árboles de tara, así como estudiar el efecto de la presencia de micorrizas en el crecimiento y desarrollo de la planta. Para ello, se utilizó el análisis molecular por la técnica Miseq Illumina que ha permitido comprobar la diversidad de micorrizas (de tipo arbuscular) con una preponderancia de la familia Glomeraceae; en particular el género Rhizophagus spp, el cual estuvo presente en un 70% de las secuencias. También, se demostró que C. spinosa presenta una micorrización obligatoria. Después de haber probado la micorrización controlada de C. spinosa por Rhizophagus irregularis, el crecimiento vegetativo del cultivo, la absorción de nutrientes como el nitrógeno y el fósforo se incrementaron significativamente respecto a las plantas testigo. Además, considerando que la tara es una especie leguminosa, se evaluó la nodulación racinaria. Se utilizaron diferentes medios de cultivo así como diferentes condiciones de crecimiento, en invernadero e in vitro, poniendo en evidencia que las raíces de tara no presentaron nódulos rizobianos, confirmando que esta leguminosa es no nodulante. Se recurrió al uso de Pisum sativum (arveja, leguminosa asociada al cultivo de tara), como una planta trampa para el estudio de la diversidad de rizobias presentes en el suelo proveniente de la plantación de tara. Las rizobias provenientes de los suelos dentro de la plantación registradas resultaron ser muy específicas y diferentes de las rizobias provenientes de suelos fuera de la plantación de tara. Así mismo, estas rizobias encontradas demostraron ser cercanas filogenéticamente a R. etli, R. phaseoli, R. pisi y R. leguminosarum. Finalmente, se realizó una prueba de inoculación controlada (in vitro) en plantas de arveja, con las bacterias previamente atrapadas e aisladas a partir de la arveja; donde se observó que las bacterias rizosféricas provenientes de la plantación de tara estimularon el crecimiento de este cultivo con respecto a las bacterias presentes en suelos recogidos fuera de la plantación.
2018-01-01T00:00:00ZDeterminación de parámetros para evaluar los efectos de Uncaria tomentosa sobre la producción de especies reactivas del oxígeno, polarización de monocitos-macrófagos humanos M1/M2 y sobre células inmunocompetentes en un modelo de melanoma murinoLozada Requena, Arcadio Ivánhttps://hdl.handle.net/20.500.12866/14162021-03-27T01:03:04Z2017-01-01T00:00:00ZDeterminación de parámetros para evaluar los efectos de Uncaria tomentosa sobre la producción de especies reactivas del oxígeno, polarización de monocitos-macrófagos humanos M1/M2 y sobre células inmunocompetentes en un modelo de melanoma murino
Lozada Requena, Arcadio Iván
Existen productos naturales con probada capacidad inmunoestimulante, con compuestos químicos actuando en sinergia o de manera individual que son capaces de afectar la actividad de células inmunocompetentes y de ejercer efectos inmunoestimulantes o inmunomoduladores sobre moléculas importantes para la defensa tanto en condiciones fisiológicas como patológicas. La Uncaria tomentosa o Uña de Gato (UT), una liana de la selva peruana usada en la medicina tradicional por muchos años tiene probadas propiedades inmunoestimulantes en distintas condiciones incluyendo enfermedades inflamatorias y cáncer. Dentro de los componentes inmunocompetentes se encuentran los monocitos-macrófagos, células dendríticas y las poblaciones linfocitarias quienes participan activamente en la inmunidad innata y adaptativa. Asimismo, las citoquinas producidas por estas células promueven la comunicación celular y la ejecución de mecanismos importantes para la defensa. En este estudio experimental in vitro se ha demostrado que el extracto de UT en monocitos-macrófagos de humanos sanos no altera la viabilidad; no es citotóxico; ni induce apoptosis entre 6,25 – 100ug/mL y que a 25ug/mL desencadena el incremento de la producción de especies reactivas del oxígeno (ROS) que podría mejorar la actividad microbicida contra C. albicans; induce una polarización M2 que transita hacia una mixta M1/M2 a nivel transcripcional y proteomico, es decir, receptores de reconocimiento, citoquinas y quimioquinas. Interesantemente, UT-TOA logró incrementar la producción de IFN-γ siendo posible que los monocitos-macrófagos mejoren su capacidad inmunoestimulante. Además, la evaluación de células inmunocompetentes y sus citoquinas en un modelo de melanoma en ratones demostró una mejor actividad de UT-TOA a nivel sistémico que en el microambiente tumoral donde a 1000mg/kg se incrementa la relación CD4/CD8a incluyendo el nivel de activación (CD44) sobretodo a 50 y 500mg/kg y además se incrementa la producción de la citoquina Th1 (TNF-α); mientras que la citoquina Th17 (IL-17A) disminuye existiendo una tendencia de correlación entre la relación de linfocitos y ambas citoquinas. El único parámetro que dio una respuesta positiva en el microambiente tumoral es el incremento del porcentaje de células dendríticas mieloides. Tomados juntos todos los resultados concluimos que el extracto de UT-TOA podría tener una actividad inmunoestimulante sobre células inmunocompetentes y sus citoquinas en condiciones de normalidad y de enfermedad (modelo de melanoma), lo cual abre nuevas avenidas en el estudio de este producto natural.
2017-01-01T00:00:00ZUnderstanding new aspects of the mechanism and biomarkers of pyrazinamide resistance in mycobacterium tuberculosisRueda Ráez, Luis Danielhttps://hdl.handle.net/20.500.12866/13912021-03-27T01:03:02Z2017-01-01T00:00:00ZUnderstanding new aspects of the mechanism and biomarkers of pyrazinamide resistance in mycobacterium tuberculosis
Rueda Ráez, Luis Daniel
La Pirazinamida (PZA), junto con la isoniazida y la rifampicina son considerados los medicamentos pilares del tratamiento antituberculoso. Durante las últimas décadas se ha incrementado la identificación de pacientes infectados con Mycobacterium tuberculosis resistente a antibióticos, lo cual complica el control de la enfermedad alrededor del mundo. El gen de M. tuberculosis pncA codifica a una nicotinamidasa intracelular llamada pirazinamidasa, debido a que hidroliza la droga antituberculosa pirazinamida (PZA) en su componente activo, ácido pirazinóico (POA), el cual se cree es el causante de la muerte de la micobacteria. Con el objetivo de contribuir al control de la tuberculosis, esta tesis doctoral: 1) reporta que la pirazinamidasa de M. tuberculosis PZAse es capaz de formar dímeros que mantienen la actividad enzimática, así como que puede formar complejos multiméricos de alto peso molecular con reducida actividad enzimática; 2) reporta la expresión in vitro en un sistema libre de célula (cell-free expression) de un grupo de pirazinamidasas obtenidas a partir de aislados clínicos susceptibles y resistentes a PZA, caracterizándolos enzimáticamente y contrastando estos resultados con resultados de fenotipificación de las mismas cepas; 3) acoplado al resultado anterior, se presenta la estandarización de un nuevo método para estimar la actividad de pirazinamidasa utilizando un espectrómetro de masas MALDI-TOF; y 4) se presenta la prueba de concepto de un nuevo método de cuantificar ácido pirazinoico en solución.
2017-01-01T00:00:00ZPatrones de consumo alimentario, estado nutricional y características metabolómicas en muestras poblacionales urbanas del nivel del mar y altura del PerúCaballero Gutiérrez, Lidia Sofíahttps://hdl.handle.net/20.500.12866/10122021-03-27T01:02:43Z2017-01-01T00:00:00ZPatrones de consumo alimentario, estado nutricional y características metabolómicas en muestras poblacionales urbanas del nivel del mar y altura del Perú
Caballero Gutiérrez, Lidia Sofía
La investigación tuvo el objetivo de analizar las asociaciones entre el patrón de consumo alimentario, estado nutricional y características metabolómicas de muestras poblacionales urbanas del nivel del mar (NM) y altura del Perú. Es un estudio comparativo-descriptivo, correlacional de corte transversal, en dos zonas de altura: Cerro Pasco (4340 m) y Puno (3800 m) y dos a NM: Lima (150 m) e Iquitos (104 m). En 200 varones y 200 mujeres entre 18 a 65 años, se evaluó el consumo alimentario y estado nutricional y en 70 voluntarios de Puno y 30 de Lima se realizó el estudio metabolómico. ANOVA, U Mann Whitney, fueron utilizadas para comparar medias, regresión lineal simple y múltiple para evaluar asociaciones y Chi cuadrado para comparar proporciones. P<0.05 se consideró como significativo. Se encontró que el consumo de carbohidratos es mayor en altura (p<0.05) en relación a NM; las grasas totales se encuentran dentro de los parámetros establecidos con diferencias en la calidad de grasas; el porcentaje de proteínas excede el parámetro de referencia en NM. En vitaminas y minerales, el consumo de retinol, vitamina A, riboflavina, niacina, ácido ascórbico, sodio, fósforo y hierro cubre el requerimiento en las 4 ciudades. Es deficiente en calcio, potasio, ácido pantoténico y piridoxina. La prevalencia de bajo peso, sobrepeso y obesidad es de 7%, 31% y 15% respectivamente a NM y de 4%, 29%, 28% en altura, la obesidad es prevalente en altura (p<0.05). La prevalencia de ectomorfos, mesomorfos y endomorfos es de 2%, 33%, 66%, respectivamente a NM y de 1%, 49%, y 51% en la altura. La expresión de metabolitos derivados del metabolismo de carbohidratos, proteínas, grasas y vitaminas es mayor en altura en relación a NM. Muestran mayores diferencias; la maltosa, maltoriosa, isovalerato, glutamil-ε-lisina, palmitoilcolina, dihomolinoleoil colina, leucotrieno B4 y α-tocoferol a NM y el 3-fosfoglicerato, lactato, α-cetoglutarato, dopamina, cisteinilglicina, 5-oxoprolina, linoleoil etanolamina y treonato en altura. El perfil lipídico muestra valores de LDL y HDL dentro de parámetros normales. Son elevados los triglicéridos y VLDL en altura que a NM. La glicemia es menor en altura que NM. (p<0.05). Se concluye; el consumo alimentario es elevado en carbohidratos en altura y en proteínas a NM, con similares características en el contenido graso. Se encuentran metabolitos derivados de los carbohidratos, grasas y proteínas asociados a obesidad y altura.
2017-01-01T00:00:00Z