Optimización de un sistema recombinante para el monitoreo in vivo de la transcripción de M. tuberculosis

Guerra Giraldez, Daniel; Espinoza Huertas, Keren

dc.contributor.author	Espinoza Huertas, Keren
dc.contributor.author	Guerra Giraldez, Daniel
dc.date.accessioned	2021-12-02T18:52:49Z
dc.date.available	2021-12-02T18:52:49Z
dc.date.issued	2021
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/10138
dc.description.abstract	Introducción: La investigación de la transcripción de Mycobacterium tuberculosis in vitro resulta laboriosa y compleja pues involucra muchas proteínas interactuando a la vez. En nuestro laboratorio, se diseñó un sistema recombinante que contiene la maquinaria básica de transcripción de M. tuberculosis y es capaz de medir la transcripción in vivo. Sin embargo, nuestro sistema presentó problemas de especificidad (Unión del core de la ARN polimerasa de E. coli y la subunidad σA de M. tuberculosis) y de una sobreexpresión muy alta de la señal fluorescente. Planteamos mejorar el sistema reportero uniendo la subunidad σA a una proteína de unión específica a la ARN polimerasa (ARNP) de M. tuberculosis y obtener así una señal fluorescente diferenciable fácilmente y específica para actividad de la ARNP de M. tuberculosis. Metodología: Se fusionó σA con la subunidad β’ de la ARNP de tuberculosis y por otro lado se fucionó σA con la proteína RbpA (factor de transcripción exclusivo de tuberculosis). Ambas versiones fusionadas, σA-β’ y σA-RbpA) se reemplazaron en nuestro sistema reportero y se midió la transcripción de la enzima ARNP con estas fusiones in vivo mediante fluorescencia. Resultados: Se observó señal fluorescente con ambas ARNPs, la que tiene la fusión σA-β’ y la que tiene σA-RbpA. Los ensayos con la fusión σA-RbpA aún presentan problemas de especificidad (Unión al core de la ARNP de E. coli). Con la fusión σA-β’ se observó mejora en la especificidad y una señal fluorescente claramente diferenciable en comparación con los controles (diferencia > al 100%). Conclusiones: Se logró mejorar la especificidad del sistema reportero de actividad de la ARNP de M. tuberculosis fusionando la subunidad σA con la subunidad β’ de la misma enzima.	es_PE
dc.format	application/pdf
dc.language.iso	spa
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/
dc.subject	Posgrado	es_PE
dc.subject	Biología Molecular, Biotecnología y Bioinformática	es_PE
dc.title	Optimización de un sistema recombinante para el monitoreo in vivo de la transcripción de M. tuberculosis
dc.type	info:eu-repo/semantics/conferenceObject
dc.description.conferenceDate	2021-09-13
dc.relation.conference	XXIII Jornadas Científicas Roger Guerra-García Cueva	es_PE