Desarrollo de una técnica para el diagnóstico molecular de Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) en muestras de heces basada en la amplificación isotérmica con recombinasa y polimerasa (RPA)

Cabrera Sosa, Luis Esteban

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Maestría en Bioquímica y Biología Molecular
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dc.contributor.advisor	Ochoa Woodell, Theresa Jean	es_ES
dc.contributor.advisor	Adaui Sicheri, Vanessa Karina	es_ES
dc.contributor.author	Cabrera Sosa, Luis Esteban	es_ES
dc.date.accessioned	2018-02-05T17:54:36Z
dc.date.available	2018-02-05T17:54:36Z
dc.date.issued	2017
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/1031
dc.description.abstract	Introducción: La Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) causa diarrea principalmente en niños menores de 5 años. Su diagnóstico se basa en la detección de las toxinas termolábil (LT) y/o termoestable (ST). Actualmente, se usan técnicas moleculares basadas en la reacción en cadena de la polimerasa (PCR), pero su aplicación en el punto de atención al paciente es difícil. La amplificación isotérmica con recombinasa y polimerasa (RPA) es una técnica isotérmica reciente que se viene evaluando en la detección de varios patógenos y tiene potencial para su uso en zonas de bajos recursos. Objetivo: El objetivo de este trabajo fue desarrollar un método para el diagnóstico de ETEC en muestras de heces mediante la detección simultánea de los genes para las toxinas LT y ST usando RPA. Métodos: Se diseñaron y seleccionaron primers para los genes codificantes de las toxinas LT y ST (ST-Ia y ST-Ib) adecuados para su detección simultánea por RPA. Se determinaron las condiciones de reacción óptimas (temperatura y tiempo) y se evaluaron la especificidad (ausencia de reacción cruzada con otros patógenos) y la sensibilidad (límite de detección) analíticas. Se determinó la sensibilidad y la especificidad diagnóstica de la técnica de RPA en 298 muestras de heces previamente recolectadas usando la PCR en tiempo real como estándar de oro. Resultados: Se diseñaron 32 primers para las tres toxinas de ETEC. Para la amplificación con RPA, se seleccionaron 2 primers para LT, mientras que se usaron primers previamente reportados para ST-Ia y ST-Ib. Los tres genes pudieron ser amplificados con RPA; sin embargo, no se pudo secuenciar los productos para corroborar. Solo se logró la detección simultánea para LT y ST-Ia. La RPA funcionó entre 30°C y 50°C y el tiempo mínimo de reacción fue de 5 min. No hubo reacción cruzada con otros enteropatógenos. El límite de detección para los genes de las toxinas LT y ST-Ia fue 10 y 100 UFC/rxn, respectivamente. La sensibilidad de la RPA para la detección de ETEC fue 91.57% (intervalo de confianza al 95% [IC 95%]: 87.52 – 94.64%) y la especificidad fue 94.59% (IC 95%: 81.81 – 99.34%). Conclusiones: Se desarrolló una técnica para la detección de ETEC en heces usando RPA. La sensibilidad y especificidad analíticas son óptimas. La alta sensibilidad y especificidad diagnósticas hacen que la técnica sea adecuada para su uso. Su implementación en el punto de atención requiere algunas modificaciones a la técnica reportada en este estudio, así como la validación por secuenciación.	es_ES
dc.format	application/pdf	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia	es_ES
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	es_ES
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es	es_ES
dc.subject	Escherichia coli Enterotoxigénica	es_ES
dc.subject	Recombinasas	es_ES
dc.subject	Reacción en Cadena de la Polimerasa	es_ES
dc.subject	Diarrea	es_ES
dc.subject	Patología Molecular	es_ES
dc.title	Desarrollo de una técnica para el diagnóstico molecular de Escherichia coli enterotoxigénica (ETEC) en muestras de heces basada en la amplificación isotérmica con recombinasa y polimerasa (RPA)	es_ES
dc.type	info:eu-repo/semantics/masterThesis	es_ES
thesis.degree.name	Maestro en Bioquímica y Biología Molecular	es_ES
thesis.degree.grantor	Universidad Peruana Cayetano Heredia. Escuela de Posgrado Víctor Alzamora Castro	es_ES
thesis.degree.discipline	Bioquímica y Biología Molecular	es_ES
dc.publisher.country	PE	es_ES
dc.subject.ocde	https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03	es_ES
renati.type	http://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis	es_ES
renati.level	http://purl.org/pe-repo/renati/level#maestro	es_ES
renati.discipline	917067	es_ES