Expresión, purificación y actividad enzimática de la proteína recombinante Catepsina L5 de Fasciola hepatica (rCatL5Fh) obtenida en un sistema de expresión procariota (E. coli BL21)

Buiza Urdanivia, Yerson Jahel

dc.contributor.advisor	Espinoza Babilón, Jose Ronald	es_ES
dc.contributor.advisor	Espinoza Ramírez, Jenniffer Angélica	es_ES
dc.contributor.author	Buiza Urdanivia, Yerson Jahel	es_ES
dc.date.accessioned	2022-01-19T22:52:03Z
dc.date.available	2022-01-19T22:52:03Z
dc.date.issued	2021
dc.identifier.other	104046	es_ES
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/11226
dc.description.abstract	Fasciola hepatica produce, durante la infección, una serie de cisteínas tipo catepsina L la cual permiten al parásito la invasión, alimentación y evasión del sistema inmune. El tremátodo expresa 7 isoformas de Catepsina tipo L, siendo catepsina L5 (CatL5Fh) secretada en mayor proporción en el estadio adulto; por lo que se considera que esta proteinasa está involucrada en la supervivencia y alimentación ya que puede degradar componentes proteicos del hospedero definitivo. En la Unidad de Biotecnología Molecular (UBM) se ha determinado que CatL5Fh puede degradar ST3 (codificado en UBM) por lo cual resulta de interés evaluar esta cisteina proteinasa como un potencial agente de aplicación biomédico. Debido a que la purificación de CatL5Fh nativa a partir de parásitos adultos requiere de inversión de costo y tiempo resultando en bajos rendimientos de la proteinasa pura; el objetivo del presente estudio es expresar rCatL5Fh en el sistema de expresión del vector pET-26b(+) en las cepas BL21 y Rosetta de Escherichia coli, purificar y caracterizar su actividad con el sustrato ST3. rCatL5Fh fue clonada y expresada por fermentación con diferentes concentraciones de IPTG y en distintos tiempos para controlar la formación de cuerpos de inclusión. El más alto rendimiento de producción de rCatL5Fh purificada que se obtuvo con BL21 fue de 4.5 mg por 100 ml de cultivo con 1 mM de IPTG, 37 °C por 16 horas y con Rosetta fue de 6 mg por 100 ml con 0.25 mM de IPTG, 37 °C por 8 horas. Sin embargo, rCatL5Fh purificada por distintos procedimientos no tuvo actividad proteolítica por lo que se sugiere que esta proteinasa requiere transitar por el sistema de secreción para lograr las modificaciones post-traduccionales y el plegamiento adecuado de su forma activa, procesos que no ocurren en los sistemas de expresión procariotas.	es_ES
dc.description.abstract	Fasciola hepatica produces, during infection, a series of cathepsin L-type cysteines which allow the parasite to invade, feed, and escape the immune system. The trematode expresses 7 isoforms of Cathepsin type L, being cathepsin L5 (CatL5Fh) secreted in a higher proportion in the adult stage; therefore, it is considered that this proteinase is involved in survival and feeding since it can degrade protein components of the definitive host. At the Molecular Biotechnology Unit (UBM) it has been determined that CatL5Fh can degrade ST3 (encoded in UBM), therefore it is of interest to evaluate this cysteine proteinase as a potential agent for biomedical application. Because the purification of native CatL5Fh from adult parasites requires investment of cost and time resulting in low yields of pure proteinase; The objective of the present study is to express rCatL5Fh in the expression system of the vector pET-26b (+) in the BL21 and Rosetta strains of Escherichia coli, to purify and characterize its activity with the ST3 substrate. rCatL5Fh was cloned and expressed by fermentation with different concentrations of IPTG and at different times to control the formation of inclusion bodies. The highest production yield of purified rCatL5Fh that was obtained with BL21 was 4.5 mg per 100 ml of culture with 1 mM IPTG, 37 ° C for 16 hours and with Rosetta it was 6 mg per 100 ml with 0.25 mM IPTG, 37 ° C for 8 hours. However, rCatL5Fh purified by different procedures did not have proteolytic activity, which is why it is suggested that this proteinase requires transit through the secretion system to achieve post-translational modifications and proper folding of its active form, processes that do not occur in systems of prokaryotic expression.	es_ES
dc.format	application/pdf	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia	es_ES
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	es_ES
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es	es_ES
dc.subject	Escherichia coli	es_ES
dc.subject	Recombinante	es_ES
dc.subject	Proteasa	es_ES
dc.subject	Fasciola hepatica	es_ES
dc.subject	Catepsina L5	es_ES
dc.title	Expresión, purificación y actividad enzimática de la proteína recombinante Catepsina L5 de Fasciola hepatica (rCatL5Fh) obtenida en un sistema de expresión procariota (E. coli BL21)	es_ES
dc.type	info:eu-repo/semantics/bachelorThesis	es_ES
thesis.degree.name	Licenciado en Biología	es_ES
thesis.degree.grantor	Universidad Peruana Cayetano Heredia. Facultad de Ciencias y Filosofía Alberto Cazorla Talleri	es_ES
thesis.degree.discipline	Biología	es_ES
dc.publisher.country	PE	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.07	es_ES
renati.author.dni	71309420
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0003-2055-7554	es_ES
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0002-3473-4796	es_ES
renati.advisor.dni	06694490
renati.advisor.dni	45147285
renati.type	http://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis	es_ES
renati.level	http://purl.org/pe-repo/renati/nivel#tituloProfesional	es_ES
renati.discipline	511206	es_ES
renati.juror	De Stefano Beltrán, Luis Julio César	es_ES
renati.juror	Colarossi Salinas, Ana Cecilia	es_ES
renati.juror	Inga Peña, Rocío de María	es_ES