Amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección colorimétrica de blancos multicopias de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum

Nolasco Cardenas, Oscar Patricio

dc.contributor.advisor	Gamboa Vilela, Dionicia Baziliza	es_ES
dc.contributor.author	Nolasco Cardenas, Oscar Patricio	es_ES
dc.date.accessioned	2023-04-27T20:40:14Z
dc.date.available	2023-04-27T20:40:14Z
dc.date.issued	2022
dc.identifier.other	201296	es_ES
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/13456
dc.description.abstract	El diagnóstico temprano y especifico es uno de los principales objetivos en las estrategias para el control de la malaria. El presente estudio evalúa la tecnología de amplificación isotérmica mediada por bucle (LAMP del inglés Loop-mediated isothermal amplification), validando un sistema comercial y desarrollando un sistema LAMP colorimétrico “in house” empleando secuencias de genes multicopia para la detección de Plasmodium vivax y de Plasmodium falciparum mediante la visualización directa del cambio de coloración del indicador rojo neutro de amarillo a fucsia en las reacciones positivas. Los límites de detección (LOD del inglés Limit of detection) de las pruebas desarrolladas se estimaron entre 2.4 y 3.7 parásitos/μl de sangre. El mejor desempeño para la detección de P. vivax, fue obtenido con el blanco de amplificación COX1, mientras que el diseño con el blanco de amplificación Pfr364 fue el más específico para la detección de P. falciparum. En el diagnóstico para P. vivax y P. falciparum, los resultados empleando sangre entera indican que el LAMP colorimétrico “in house” puede detectar entre el 36,6 y 80.2 % de infecciones submicroscópicas. La máxima capacidad de detección se logró empleando ADN purificado con filtros de sílice; sin embargo, una preparación rápida de la muestra (Hervido y Centrifugado), mostro resultados tan confiables como los obtenidos por microscopía en muestras de sangre entera o sangre impregnada en papel filtro.	es_ES
dc.description.abstract	Early and specific diagnosis is one of the main objectives in malaria control strategies. The present study assesses Loop-mediated isothermal amplification (LAMP) technology, validating a commercial system and developing an in-house colorimetric LAMP system using multicopy gene sequences to detect Plasmodium vivax and Plasmodium falciparum with direct visualization of the color change of the neutral red indicator from yellow to fuchsia in the positives reactions. The limits of detection (LOD) of the test developed were estimated to be between 2.4 and 3.7 parasites/μl of blood. The best performance for the P. vivax detection was obtained with the COX1 amplification target, while the design with the Pfr364 amplification target was the most specific for P. falciparum detection. In the P. vivax and P. falciparum diagnosis, the results using whole blood sample indicate that the colorimetric LAMP in-house can detect between 36.6 and 80.2% of submicroscopic infections. The maximum detection capacity of colorimetric LAMP in-house was achieved using purified DNA with silica filter; however, a rapid sample preparation (Boil & Spin) showed result as reliable as those obtained by microscopy in samples of whole blood or blood impregnated on filter paper.	es_ES
dc.format	application/pdf	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia	es_ES
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	es_ES
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es	es_ES
dc.subject	Malaria	es_ES
dc.subject	LAMP	es_ES
dc.subject	Diagnóstico Molecular	es_ES
dc.subject	Amplificacion Isotermica	es_ES
dc.title	Amplificación isotérmica mediada por bucle para la detección colorimétrica de blancos multicopias de Plasmodium vivax y Plasmodium falciparum	es_ES
dc.type	info:eu-repo/semantics/doctoralThesis	es_ES
thesis.degree.name	Doctor en Ciencias de la Vida	es_ES
thesis.degree.grantor	Universidad Peruana Cayetano Heredia. Escuela de Posgrado Víctor Alzamora Castro	es_ES
thesis.degree.discipline	Ciencias de la Vida	es_ES
dc.publisher.country	PE	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.06	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.07	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08	es_ES
renati.author.dni	15357303
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0002-1420-7729	es_ES
renati.advisor.dni	07478767
renati.type	http://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis	es_ES
renati.level	http://purl.org/pe-repo/renati/nivel#doctor	es_ES
renati.discipline	511098	es_ES
renati.juror	Verástegui Pimentel, Manuela Reneé	es_ES
renati.juror	Maita Malpartida, Holger	es_ES
renati.juror	Adaui Sicheri, Vanessa Karina	es_ES
renati.juror	Pajuelo Travezaño, Mónica Jehnny	es_ES