Implementación y establecimiento de un punto de corte en un test de Wayne cuantitativo para detectar la susceptibilidad a PZA en cultivos MODS de muestras de esputo

Toscano Guerra, Emily Marisol

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Maestría en Bioquímica y Biología Molecular
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dc.contributor.advisor	Sheen Cortavarría, Patricia	es_ES
dc.contributor.author	Toscano Guerra, Emily Marisol	es_ES
dc.date.accessioned	2024-01-22T21:18:05Z
dc.date.available	2024-01-22T21:18:05Z
dc.date.issued	2023
dc.identifier.other	206780	es_ES
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/14876
dc.description.abstract	La pirazinamida (PZA) es una droga importante para el acortamiento del tratamiento antituberculoso, es la única que actúa sobre las micobacterias latentes. La susceptibilidad a PZA puede ser determinada evaluando: el crecimiento de la micobacteria frente a la droga (BACTEC 960), la actividad enzimática de la pirazinamidasa (PZAsa) (Test de Wayne) que detecta al ácido pirazinoico (POA) o molecularmente, identificando variantes o mutaciones presentes en el gen pncA que puede afectar su actividad normal. BACTEC MGIT960 ha sido la única prueba de susceptibilidad (DST) recomendada por la OMS, sin embargo, ha reportado alto índice de falsos resistentes, quizás por la dificultad de mantener un pH adecuado y controlar el inóculo cultivado. El secuenciamiento conlleva un alto costo y, además, un cierto porcentaje de mutaciones puede no afectar la actividad enzimática, o cepas WT manifiestan resistencia, por lo que hay otros mecanismos que estarían implicados en la resistencia. En este estudio planteamos cuantificar la producción de POA en cultivo líquido directamente de esputo luego de su incubación con PZA (MODS-WQ), a diferencia del test de Wayne convencional que se basa en la observación del color. Se usaron 264 muestras de esputo de pacientes con tuberculosis y se evaluó dos variantes del medio: caldo 7H9 y buffer citrato, ambas a pH neutral. La variante en buffer citrato identificó correctamente el 92.6% de los aislados resistentes y el 95.6% de los aislados sensibles, usando como gold estándar las tres DST mencionadas. La variante en 7H9 identificó 81.3% resistentes y 77.2% sensibles. Los resultados se obtuvieron en un promedio de 13 días.	es_ES
dc.description.abstract	Pyrazinamide (PZA) is an important drug for shortening anti-tuberculosis treatment as it is the only one that acts on latent mycobacteria. Susceptibility to PZA can be determined by evaluating the growth of mycobacteria against the drug (BACTEC 960), the enzymatic activity of pyrazinamidase (PZAsa) through the Wayne Test, which detects pyrazinoic acid (POA) or molecularly, identifying variants or mutations present in the pncA gene that can affect its normal activity. The BACTEC MGIT960 has been the only susceptibility test recommended by the WHO, however, it has reported a high rate of false resistance, perhaps due to the difficulty of maintaining an adequate pH and controlling the amount of cultured inoculum. Sequencing carries a high cost, and, in addition, a certain percentage of mutations may not affect their enzymatic activity, or WT strains show resistance, so there are some mechanisms that are not well studied that would be involved in resistance. In this study we propose to quantify the production of POA in liquid culture directly from sputum after its incubation with PZA (MODS-WQ), unlike the conventional Wayne test that is based on the observation of color. 264 sputum samples from tuberculosis patients were used to evaluate two medium variants: 7H9 broth and citrate buffer, both at neutral pH. The variant in citrate buffer correctly identified 92.6% of the resistant isolates and 95.6% of the sensitive isolates, using the three mentioned DSTs as the gold standard. The 7H9 variant identified 81.3% resistant and 77.2% sensitive. Results were obtained in an average of 13 days.	es_ES
dc.format	application/pdf	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia	es_ES
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	es_ES
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es	es_ES
dc.subject	Tuberculosis	es_ES
dc.subject	MODS	es_ES
dc.subject	Wayne Cuantitativo	es_ES
dc.subject	Ácido Pirazinoico	es_ES
dc.title	Implementación y establecimiento de un punto de corte en un test de Wayne cuantitativo para detectar la susceptibilidad a PZA en cultivos MODS de muestras de esputo	es_ES
dc.type	info:eu-repo/semantics/masterThesis	es_ES
thesis.degree.name	Maestra en Bioquímica y Biología Molecular	es_ES
thesis.degree.grantor	Universidad Peruana Cayetano Heredia. Escuela de Posgrado Víctor Alzamora Castro	es_ES
thesis.degree.discipline	Bioquímica y Biología Molecular	es_ES
dc.publisher.country	PE	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.03	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.01.05	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.02.07	es_ES
dc.subject.ocde	http://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.03.08	es_ES
renati.author.dni	43849619
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0002-7118-9301	es_ES
renati.advisor.dni	09541127
renati.type	http://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis	es_ES
renati.level	http://purl.org/pe-repo/renati/nivel#maestro	es_ES
renati.discipline	917067	es_ES
renati.juror	Clark Leza, Daniel	es_ES
renati.juror	Blanco Victorio, Daniel Jose	es_ES
renati.juror	Tsukayama Cisneros, Pablo	es_ES