Estandarización de la integración del gen pncA en Mycobacterium tuberculosis pncA-knockout mediante una técnica de complementación de genes

Ochoa Ortiz, Adiana

dc.contributor.advisor	Sheen Cortavarria, Patricia	es_ES
dc.contributor.author	Ochoa Ortiz, Adiana	es_ES
dc.date.accessioned	2026-02-06T19:52:18Z
dc.date.available	2026-02-06T19:52:18Z
dc.date.issued	2025
dc.identifier.other	201704	es_ES
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/18153
dc.description.abstract	La tuberculosis (TB) es una enfermedad infecciosa contagiosa causada por la bacteria Mycobacterium tuberculosis (MTB), que afecta principalmente a los pulmones. Una de las drogas para tratar la TB es la pirazinamida (PZA), cuyo mecanismo de acción se inicia con la conversión de la PZA a su forma activa, ácido pirazinoico (POA) por acción de la pirazinamidasa (PZAsa) codificada por el gen pncA. La gran mayoría de pacientes resistentes a esta droga presentan mutaciones en pncA. Sin embargo, se han reportado resultados discordantes entre la actividad enzimática de PZAsa y la susceptibilidad a la droga usando aislados clínicos que presentan mutaciones en otras regiones genómicas.Por ello, el propósito de este estudio es estandarizar la integración de forma estable del gen pncA de tipo salvaje en el genoma de M. tuberculosis H37Rv con deleción de pncA (MTB-KO), para restaurar la actividad de la PZAsa, la susceptibilidad a la PZA y estandarizar un modelo genético que permita evaluar el impacto de mutaciones específicas del gen pncA en la resistencia a PZA. Finalmente, se logró integrar exitosamente el plásmido integrativo con el gen pncA en el genoma de MTB-KO y se demostró que la cepa complementada recuperó la expresión del gen pncA, la producción de POA y la susceptibilidad a PZA. En cambio, la cepa MTB-KO o con el plásmido vacío no produjo POA ni fue sensible a la droga. Este modelo permitió restaurar la susceptibilidad a PZA usando el gen de pncA nativo, en un contexto genético controlado y sin interferencia de otras mutaciones.	es_ES
dc.description.abstract	Tuberculosis (TB) is a contagious infectious disease caused by the bacterium Mycobacterium tuberculosis (MTB), which mainly affects the lungs.One of the drugs used to treat TB is pyrazinamide (PZA), whose mechanism of action begins with the conversion of PZA to its active form, pyrazinoic acid (POA), by pyrazinamidase (PZAsa), encoded by the pncA gene. Most patients resistant to this drug have mutations in pncA. However, conflicting results have been reported regarding PZA enzyme activity and drug susceptibility in clinical isolates harbouring mutations in other genomic regions.Therefore, the purpose of this study is to standardise the stable integration of the wild-type pncA gene into the genome of M. tuberculosis H37Rv with pncA deletion (MTB-KO) genome, to restore PZAsa activity and susceptibility to PZA, and to standardise a genetic model that allows the evaluation of the impact of specific mutations in the pncA gene on PZA resistance. Finally, the integrative plasmid carrying pncA was successfully integrated into the MTB-KO genome, and the complemented strain recovered pncA gene expression, POA production, and PZA susceptibility. In contrast, the MTB-KO strain or the strain with the empty plasmid did not produce POA and was not sensitive to the drug. This model allowed susceptibility to PZA to be restored using the native pncA gene in a controlled genetic context, without interference from other mutations.	es_ES
dc.format	application/pdf	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia	es_ES
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	es_ES
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es	es_ES
dc.subject	Mycobacterium tuberculosis H37Rv	es_ES
dc.subject	Susceptibilidad	es_ES
dc.subject	Resistencia	es_ES
dc.subject	Integración Génica	es_ES
dc.subject	Pirazinamida y Pirazinamidasa	es_ES
dc.title	Estandarización de la integración del gen pncA en Mycobacterium tuberculosis pncA-knockout mediante una técnica de complementación de genes	es_ES
dc.type	info:eu-repo/semantics/bachelorThesis	es_ES
thesis.degree.name	Licenciado en Biología	es_ES
thesis.degree.grantor	Universidad Peruana Cayetano Heredia. Facultad de Ciencias e Ingeniería	es_ES
thesis.degree.discipline	Biología	es_ES
dc.publisher.country	PE	es_ES
dc.subject.ocde	https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#1.06.01	es_ES
renati.author.dni	75682563
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0002-7118-9301	es_ES
renati.advisor.dni	09541127
renati.type	https://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis	es_ES
renati.level	https://purl.org/pe-repo/renati/level#tituloProfesional	es_ES
renati.discipline	511206	es_ES
renati.juror	Pajuelo Travezaño, Monica Jehnny	es_ES
renati.juror	Machicado Rivero, Claudia Ines Gloria	es_ES
renati.juror	Coronel Herrera, Jorge Enrique	es_ES