La Leishmaniasis Tegumentaria Americana (LTA), sobre todo la leismaniaisis cutánea (LC), tiene una alta prevalencia en las regiones alto andinas y en la cuenca amazónica del Perú y de países vecinos. Los métodos de detección basados en la amplificación de ácidos nucleicos (PCR), aunque muy sensibles y específicos, no son adecuados para las condiciones de áreas rurales de LTA porque dependen de la experiencia del personal y se requieren equipos costosos. Un enfoque alternativo es utilizar los recursos que se encuentran en las áreas endémicas para aplicar una nueva generación de pruebas serológicas mejoradas que permitan sustituir los métodos actuales utilizados en los centros de atención primaria (CAP). Dos oligopéptidos sintéticos, opH2A y opLiP2a, fueron patentados en el 2015 como posibles reactivos para el diagnóstico serológico de LTA. En este estudio se realizó el desarrollo, la optimización, la evaluación del rendimiento y la evaluación de la prueba de diagnóstico del ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas (ELISA) con un panel representativo de pacientes LC de Cusco, una de las áreas principales con casos de leishmaniasis en el país. Las condiciones óptimas para ELISA junto con un panel representativo de controles positivos y negativos han sido establecidas para validar los péptidos sintéticos opLiP2a y opH2A. Un análisis combinatorio (considera la combinación de los datos obtenidos con cada uno de los péptidos) muestra que en conjunto los péptidos opH2A y opLiP2a tienen una mayor sensibilidad (82.04%) y especificidad (98.67%) que el uso de péptidos individuales (sensibilidad de 38.46% y 51.28% para opH2A y opLiP2a respectivamente; y una especificidad del 92% y 94.67% para opH2A y opLiP2a respectivamente) o que el antígeno soluble, con una sensibilidad de 51.28% y una especificidad de 90.67%. La prueba ELISA basada en oligopéptidos opLiP2a y opH2A es alternativa para el diagnóstico de LTA con antígenos solubles en CAP rurales debido a su rapidez, simplicidad y rendimiento diagnóstico.