“DETECCIÓN DE MICROORGANISMOS PARASITARIOS Y CARACTERIZACIÓN DE LESIONES HISTOPATOLÓGICAS EN LA CONCHA DE ABANICO (Argopecten purpuratus) PROCEDENTES DE ÁNCASH- PERÚ DURANTE LOS PERIODOS DE VERANO E INVIERNO” TESIS PARA OPTAR EL GRADO DE MAESTRO EN SANIDAD ACUÍCOLA ADHEMIR AYRTON VALERA ANDRADE Lima- Perú 2018 ASESOR DE TESIS: PhD. Mg. MV. Marcos Enrique Serrano Martínez AGRADECIMIENTOS A Dios, por darme fortaleza en todos los momentos difíciles de mi vida y darme el consuelo para continuar y nunca rendirme. A la Dra. Nieves Sandoval, por la paciencia, amabilidad, el cariño y todo el conocimiento transmitido. A la Dra. Karin Lohrmann, por guiarme desde la elaboración del proyecto, siempre tener la disposición de ayudarme y por todos sus conocimientos brindados hacia mi persona, sin ella esta tesis no podría haber sido realizada. Al Dr. Luis Llanco, por apoyarme de manera constante en la tesis así como por todas las enseñanzas en este período académico. Al Dr. Enrique Serrano, por los consejos, las facilidades y el apoyo en la elaboración de la tesis. A Cleila, Rosa V., Claudia, Alessandra y Yovan por toda la ayuda en el muestreo y el procesamiento en el laboratorio. A todos mis amigos de mi promoción de la maestría por su amistad y por su apoyo en los momentos de dificultad. A la señora Charito, por su gentileza y guía en todos los procesos administrativos. DEDICATORIA A mi madre Melva, por el apoyo y el soporte en toda mi historia de vida, sin ella no podría haber logrado todos mis objetivos. A mi papá Julio Cesar, por guiarme desde el cielo y enseñarme el camino correcto desde niño, siempre te tengo presente. A mis hermanos Anais y Edson, por acompañarme y motivarme a seguir a pesar de las dificultades. FUENTES DE FINANCIAMIENTO Fondo Nacional de Desarrollo Científico, Tecnológico y de Innovación Tecnológica (FONDECYT-CIENCIA ACTIVA) al Programa de SANIDAD ACUÍCOLA (contrato 230-2015 FONDECYT. Concurso PROGRAMAS DE MAESTRÍA EN UNIVERSIDADES PERUANAS”) de la UPCH. ÍNDICE RESUMEN ABSTRACT LISTA DE CUADROS LISTA DE FIGURAS I. INTRODUCCIÓN 1 II. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA 3 III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 4 3.1 Actividad comercial de los moluscos bivalvos 4 3.1.1 Producción Nacional 5 3.1.1.1 Pesca 5 3.1.1.1.1 Desembarque 5 3.1.1.1.2 Desenvolvimiento 5 3.1.1.1.3 Mercado interno 5 3.1.1.2 Acuicultura 6 3.1.1.2.1 Exportaciones 7 3.1.1.1 Mercado Nacional 7 3.2 Concha de abanico 9 3.2.1 Clasificación taxonómica 9 3.2.2 Distribución 9 3.2.3 Morfología 10 3.2.4 Alimentación 10 3.2.5 Reproducción 10 3.2.6 Condiciones de cultivo 11 3.2.7 Tipos de cultivo de concha de abanico 11 3.2.7.1 Cultivo de fondo 11 3.2.7.2 Cultivo suspendido 12 3.3 Bahía de Samanco 12 3.4 Anatomía, fisiología e histología de los principales órganos de los moluscos bivalvos 13 3.4.1 Anatomía y fisiología de los principales órganos de los moluscos bivalvos 13 3.4.2 Histología de los principales órganos de los moluscos bivalvos 15 3.4.2.1 Branquias 15 3.4.2.2 Músculo aductor 15 3.4.2.3 Gónadas 16 3.4.2.4 Manto 16 3.4.2.5 Glándula digestiva 16 3.4.2.6 Intestino 16 3.4.2.7 Riñones o nefridios 17 3.5 Sistema Inmune de los moluscos 17 3.5.1 Inmunidad celular 17 3.5.2 Inmunidad humoral 17 3.5.2.1 Lisozimas 17 3.5.2.2 Lectinas 18 3.5.2.3 Proteínas de choque térmico 18 3.5.2.4 Sistema profenol-oxidasa 18 3.5.2.5 Péptidos antimicrobianos 18 3.6 Enfermedades de moluscos bivalvos y antecedentes 18 3.7 Principales enfermedades de moluscos bivalvos 20 3.7.1 Enfermedades bacterianas 20 3.7.1.1 Infecciones por bacterias del género Vibrio 20 3.7.1.2 Infecciones por bacterias del género Pseudomonas 21 3.7.1.3 Infecciones por procariotas del tipo Rickettsia 21 3.7.2 Enfermedades virales 22 3.7.2.1 Birnavirus 22 3.7.2.2 Herpesvirus 23 3.7.2.3 Iridovirus 23 3.7.3 Enfermedades Parasitarias 23 3.7.3.1 Perkinsus sp. 24 3.7.3.2 Bonamia sp. 24 3.7.3.3 Phylum Paramyxea 25 3.7.4 Enfermedades Por Metazoos 26 3.7.4.1 Poliquetos 26 3.7.4.2 Turbelarios 27 3.7.4.3 Cestodos larvales 27 3.7.4.4 Trematodos digeneos 28 3.7.4.5 Nematodos larvales 29 3.8 Estado sanitario de moluscos bivalvos en el país 29 IV. JUSTIFICACIÓN DEL ESTUDIO 31 V. OBJETIVOS DEL ESTUDIO 32 5.2 Objetivo general 32 5.3 Objetivos específicos 32 VI. METODOLOGÍA 33 6.1 Diseño del estudio 33 6.2 Población y muestra 33 6.3 Procedimiento y técnicas 34 6.3.1 Toma de muestra 34 6.3.2 Evaluación de los parámetros fisicoquímicos del agua 35 6.3.3 Determinación de la biometría 35 6.3.4 Evaluación macroscópica 36 6.3.5 Estudio Histopatológico 36 6.3.6 Plan de análisis 38 6.3.7 Consideraciones éticas 39 VII. RESULTADOS 40 7.1 Parámetros fisicoquímicos del agua 40 7.2 Biométricos 44 7.3 Observaciones macroscópicas 48 7.4 Histopatológicos 50 6.3.8 Branquias 50 6.3.9 Gónada masculina 56 6.3.10 Gónada femenina 59 6.3.11 Músculo aductor 64 6.3.12 Intestino 67 6.3.13 Nefridios 70 2 6.3.14 Glándula digestiva 64 6.3.15 Manto 78 7.5 Análisis estadístico 86 VIII. DISCUSIÓN 90 IX. CONCLUSIONES 102 X. RECOMENDACIONES 103 XI. BIBLIOGRAFÍA 104 3 Lista de tablas Tabla 1. Cosecha de conchas de abanico procedentes de la actividad de acuicultura en el 2006-2015 (PRODUCE, 2016) (Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola, 2015). Tabla 2. Diferencia de grados de lesiones en tejidos según su extensión en la muestra (Reimshuessel et al., 1992) Tabla 3. Evaluación Mensual de los parámetros fisicoquímicos del agua de la Bahía de Casma en Áncash-Perú evaluados en la temporada de verano. Tabla 4. Evaluación Mensual de los parámetros fisicoquímicos del agua de la Bahía de Casma en Áncash-Perú evaluados en la temporada de invierno. Tabla 5. Promedio y desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos del agua de la bahía de Casma en Áncash-Perú evaluados en la temporada de verano e invierno. Tabla 6. Promedio de datos biométricos de las conchas de abanico de Áncash- Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno). Tabla 7. Datos biométricos extremos (mayor y menor) de las conchas de abanico en Áncash-Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno). Tabla 8. Hallazgos a nivel macroscópico de las conchas de abanico en Áncash- Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno). Tabla 9. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de 2 afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 10. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambientes naturales de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 11. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 12. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambientes naturales de Áncash - Perú en período de invierno, Tabla 9. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 10. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambientes naturales de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 11. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 12. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambientes naturales de Áncash - Perú en período de invierno, Tabla 13. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su 3 grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 14. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 15. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 16. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 17. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 18. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 19. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su 4 grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 20. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 21. Frecuencia de alteraciones histológicas de músculo aductor y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 22. Frecuencia de alteraciones histológicas de músculo aductor y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 23. Frecuencia de alteraciones histológicas de músculo aductor y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 24. Frecuencia de alteraciones histológicas de músculo aductor y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 25. Frecuencia de alteraciones histológicas de intestino y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente 5 de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 26. Frecuencia de alteraciones histológicas de intestino y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 27. Frecuencia de alteraciones histológicas de intestino y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 28. Frecuencia de alteraciones histológicas de intestino y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 29. Frecuencia de alteraciones histológicas de los nefridios y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 30. Frecuencia de alteraciones histológicas de los nefridios y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 31. Frecuencia de alteraciones histológicas de los nefridios y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 32. Frecuencia de alteraciones histológicas de los nefridios y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 33. Frecuencia de alteraciones histológicas de glándula digestiva y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) 6 procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 34. Frecuencia de alteraciones histológicas de glándula digestiva y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 35. Frecuencia de alteraciones histológicas de glándula digestiva y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 36. Frecuencia de alteraciones histológicas de glándula digestiva y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 37. Frecuencia de alteraciones histológicas de manto y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 38. Frecuencia de alteraciones histológicas de glándula digestiva y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. Tabla 39. Frecuencia de alteraciones histológicas de manto y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. 7 Tabla 40. Frecuencia de alteraciones histológicas de glándula digestiva y su grado de afección en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. Tabla 41. Resultados de histología de las principales alteraciones encontradas en los distintos órganos evaluados. Tabla 42. Resultados Ji cuadrado, para comparar prevalencias de agentes parasitarios encontrados en tejidos de conchas de abanico, tomando en cuenta el origen de los individuos y la estación del año. Tabla 43. Resultados Ji cuadrado, para comparar prevalencias de lesiones encontrados en tejidos de conchas de abanico, tomando en cuenta el origen de los individuos y la estación del año. Lista de Figuras Figura 1. Producción (en millones de toneladas) de bivalvos procedentes de la pesca y de la acuicultura durante el decenio 1991-2000. Fuente: Anuarios de Estadísticas de Pesca de la FAO (2006) Figura 2. Venta Interna de Recursos marítimos procedentes de la actividad de Acuicultura en el año 2015. Fuente: Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola, 2015. Figura 3. Exportación de recursos hidrobiológicos procedentes de la actividad de acuicultura según especie (PRODUCE, 2016) Fuente: Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola, 2015. Figura 4. Exportación de concha de abanico procedente de la acuicultura y país 8 de destino (PRODUCE, 2016). Fuente: Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola, 2015. Figura 5. Concha de abanico (Argopecten purpuratus, Lamarck 1989). Fuente: FAO (2007). Figura 6. Órganos internos de Argopecten purpuratus. Flecha azul, órgano reproductor femenino y flecha negra, órgano reproductor masculino. Fuente: Helm et al. (2006) Figura7. Ciclo biológico de la concha de abanico. Fuente: http://conchasdeabanicoupc.blogspot.pe/2010/05/estados-de- desarrollo_04.html. (2010). Figura 8. Relación de la temperatura y el oxígeno disuelto en los meses de verano e invierno del agua de la bahía de Casma en Áncash-Perú. Figura 9. Promedio y desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos en todos los meses. Figura 10. Relación de la altura valvar y el peso total con el Factor de condición (FC) según los diferentes grupos de procedencia. Figura 11. Porcentaje (%) de hallazgos a nivel macroscópico de las conchas de abanico en Áncash-Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno). Figura 11 (A). Hallazgos a nivel macroscópico. Manchas blanquecinas en gónadas de concha de abanico (flechas azules) (Argopecten purpuratus). Figura 11 (B). Hallazgos a nivel macroscópico. Hydroides sp. encontrado en http://conchasdeabanicoupc.blogspot.pe/2010/05/estados-de-desarrollo_04.html http://conchasdeabanicoupc.blogspot.pe/2010/05/estados-de-desarrollo_04.html 9 concha de abanico (Argopecten purpuratus). Figura 11 (C). Hallazgos a nivel macroscópico. Perforaciones en el interior de las valvas en concha de abanico (flechas rojas) (Argopecten purpuratus). Figura 11 (D). Hallazgos a nivel macroscópico. Polydora sp. extraído de una concha de abanico (Argopecten purpuratus). Figura 12. Hiperplasia del epitelio branquial (Circulo negro). H&E 400X. Figuras 13 (RLOs) Organismos tipo Rickettsiales en tejido branquial (Círculo rojo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). H&E 400X. Figuras 14 (RLOs) Organismos tipo Rickettsiales en tejido branquial (Círculo rojo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). H&E 400X. Figuras 15 (RLOs) Organismos tipo Rickettsiales en tejido branquial (Círculo rojo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). H&E 400X. Figuras 16 (RLOs) Organismos tipo Rickettsiales en tejido branquial (Círculo rojo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). H&E 400X. Figura 17. Tremátodo entre los filamentos branquiales (Círculo amarillo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). Leve infiltración hemocítica (Círculo verde). H&E 400X. Figura 18. Infiltración hemocítica (círculos verdes) y RLOs dentro del filamento branquial (Círculo rojo). H&E 400X. Figura 19. Infiltración hemocítica (círculos verdes), RLOs dentro del filamento branquial (Círculo rojo) y necrosis del epitelio. H&E 400X. Figura 20. Infiltración hemocítica (Círculos verdes). H&E 400X. Figura 21. Infiltración hemocítica (Círculos verdes). H&E 400X. Figura 22. Infiltración hemocítica (Círculos verdes). H&E 400X. 10 Figura 23. Infiltración hemocítica (Círculos verdes). H&E 400X. Figura 24. Infiltración hemocítica en Gónada sexual masculina (Círculo verde). H&E 400X. Figuras 25 (A). Atrofia de la gónada masculina. (Se observan zonas donde no existe tejido). H&E 100X. Figuras 25 (B). Atrofia de la gónada masculina. (Se observan zonas donde no existe tejido). H&E 400X. Figura 26. Áreas de Necrosis (flechas azules) en Gónada masculina. H&E 400X. Figura 27. Infiltración hemocítica (Círculo verde) en gónada femenina. H&E 400X. Figuras 28 (A). Atrofia de la gónada masculina. (Se observan zonas donde no existe tejido). H&E 100X Figuras 28 (B). Atrofia de la gónada masculina. (Se observan zonas donde no existe tejido). H&E 400X. Figura 29. Necrosis de la gónada femenina. H&E 400X. Figura 30. Tremátodo (Círculo azul) y atrofia en la gónada femenina. H&E 400X. Figura 31. Tremátodo (Círculo azul) y atrofia en la gónada femenina. H&E 400X. Figura 32. Ooquiste de Nematopsis sp. (Círculo naranja) en músculo aductor e infiltración hemocítica (Círculo verde). H&E 400X. Figura 33. Ooquistes de Nematopsis sp. (Círculos anaranjados) en músculo aductor. H&E 400X. Figura 34. Tejido necrótico y células vacuoladas de color basófilos (Círculo morado). H&E 400X. Figura 35. Áreas de necrosis (flechas azules) e infiltración hemocítica (Círculo 11 verde). H&E 100X. Figura 36. Ooquistes dentro de la luz intestinal (Circulo anaranjado). H&E 400X. Figura 37. Necrosis del intestino (flechas azules). H&E 400X. Figura 38. Tremátodo adherido a la pared intestinal (Circulo anaranjado). H&E 400X. Figura 39. Ooquiste de Nematopsis sp. en nefridios (circulo). H&E 400X. Figura 40. Áreas de necrosis en nefridios (flechas azules). H&E 400X. Figura 41. Infiltración hemocítica en nefridios (círculos verdes). H&E 400X. Figura 42. Concreciones dentro de las células que conforman los nefridios. H&E 400X. Figura 43. Concreciones dentro de las células que conforman los nefridios. H&E 400X. Figura 44 (A). Granuloma (círculo celeste) y necrosis epitelial en glândula digestiva. H&E 100X. Figura 44 (B). Granuloma (círculo celeste) y necrosis epitelial en glândula digestiva. H&E 400X. Figura 45. Tremátodo en glândula digestiva. H&E 400X. Figura 46. Severa necrosis en glândula digestiva. H&E 400X. Figuras 47. Severa necrosis en glándula digestiva. H&E 400X. Figura 48. Infiltración hemocítica (círculos verdes) y granuloma en formación (círculo celeste) (circulo). H&E 400X. Figura 49 (A). RLOs (Círculos rojos), necrosis en glándula digestiva e infiltración hemocítica (Círculo verde). H&E 100X. Figura 49 (B). RLOs (Círculos rojos), necrosis en glándula digestiva e infiltración 12 hemocítica (Círculo verde). H&E 400X. Figura 50. RLOs (Círculos rojos) y necrosis en glándula digestiva. H&E 400X. Figura 51. Severa infiltración hemocítica (Círculos verde) y necrosis en glándula digestiva. H&E 400X. Figura 52. Infiltración hemocítica (Círculo verde) en manto. H&E 400X. Figura 53. RLOs (Círculo rojo) y áreas de necrosis (flechas azules). H&E 400X. Figura 54 (A). Tremátodo en manto (círculo azul), se observa como los hemocitos se alargan para arrestar al parásito (flechas anaranjadas). H&E 100X. Figura 54 (B). Tremátodo en manto (círculo azul), se observa como los hemocitos se alargan para arrestar al parásito (flechas anaranjadas). H&E 400X. Figura 55. Tremátodo en manto (círculo azul). H&E 400X. Figura 56. Tremátodo en manto (círculo azul). H&E 400X. Figura 57. Granuloma en manto (círculo). H&E 400 13 RESUMEN La acuicultura en el Perú se ha incrementado en los últimos años, donde destaca el cultivo de conchas de abanico (Argopecten purpuratus). En nuestro país se conoce poco de los organismos que afectan a esta especie. El objetivo del estudio es detectar a los agentes parasitarios y describir las lesiones histopatológicas en la concha de abanico procedentes de Áncash en periodo de verano e invierno. Se muestrearon 360 conchas de abanico en total, de las cuales, la mitad provino de la estación de verano (180) y la otra mitad de invierno (180), que a su vez también provinieron de centros de producción y la otra mitad (90) del medio natural. Las muestras fueron conservadas en fijador de Davidson y luego procesadas para el estudio histológico. Se realizó la prueba ji cuadrado para el análisis estadístico. Los hallazgos histológicos encontrados en branquias y glándula digestiva fueron similares, se encontró en los 4 grupos Rickettsial Like Organisms (RLOs) y en todos los grupos se observó infiltración hemocítica y necrosis de los tejidos, la prevalencia de RLOs estuvo asociada a la temporada del año. Con respecto a los nefridios, se pudo encontrar que todos los grupos presentaron concreciones y en caso del manto, se observó infiltración hemocítica, granulomas, tremátodos en el grupo de conchas de abanico silvestres en verano; la prevalencia de los tremátodos estuvo asociada a la procedencia de los animales. Se concluye que existen microorganismos parasitarios y distintos tipos de lesiones tisulares en conchas de abanico procedentes del medio natural y centros de producción de Ancash- Perú en periodos de verano e invierno. Palabras clave: Argopecten purpuratus, histología, organismos parasitarios, Áncash, Rickettsial Like Organisms. 14 ABSTRACT Aquaculture in Peru has increased in recent years, where cultivation of fan shells (Argopecten purpuratus) stands out. In our country, little is known about organisms affect this specie. The objective of this study is to detect parasitic agents and describe the histopathological lesions in the fan shell from Ancash during the summer and winter periods. A total of 360 scallops were sampled, of which half came from summer season (180) and the other from winter (180), which in turn also came from production centers and the other half (90) of natural environment. Samples were preserved in Davidson's fixative and then processed for histological study. The chi-squared test was performed for statistical analysis. Histological findings found in gills and digestive glands were similar, Rickettsial Like Organisms (RLOs) and hemocytic infiltration and necrosis of the tissues was observed in all four groups; the prevalence of RLOs was associated to season of the year. With regard to nephridios, it was possible to find that all the groups presented concretions and in the case of the mantle, hemocytic infiltration, granulomas, and trematodes were observed in the group of wild scallop shells in summer; the prevalence of trematodes was associated to origin of animals. We conclude that there are parasitic microorganisms and different types of tissue lesions in fan shells from the natural environment and production centers of Ancash-Peru in summer and winter periods. Key words: Argopecten purpuratus, histology, parasitic organisms, Ancash, Rickettsial Like Organisms. 1 I.INTRODUCCIÓN La acuicultura en los últimos años ha tomado vital importancia, en el cual se incluye la explotación y comercio de moluscos bivalvos. Esta actividad es una parte importante en la actividad acuícola a nivel global. En nuestro país destaca el cultivo de concha de abanico, siendo Piura y Áncash los dos lugares con mayor producción a nivel nacional. Estos animales son procesados y exportados como producto alimenticio principalmente a África, Europa y Oceanía. Uno de los principales desafíos de la producción de moluscos bivalvos es el conocimiento, prevención y control de las enfermedades. El estrés producido por cambios fisicoquímicos en el agua o por el hacinamiento puede provocar la aparición y el desarrollo de diversas enfermedades, las cuales son transmitidas de manera muy rápida debido a que el agua actúa como medio de infección. Diversos agentes causan daño directamente a la concha de abanico como bacterias, virus y parásitos, los cuales afectan y causan lesiones en los tejidos de estos animales acuáticos, dentro de este grupo destacan los agentes parasitarios los cuales en algunos casos pueden llegar a provocar altas mortalidades y es el motivo por el cuál un grupo de ellos se encuentra en la lista de agentes causantes de enfermedades de reporte obligatorio para la OIE. 2 En el presente trabajo, se realizó la detección de microorganismos parasitarios y el estudio histopatológico en el molusco bivalvo concha de abanico (Argopecten purpuratus) proveniente de la bahía de Casma en Áncash- Perú durante períodos de verano e invierno. 3 II. PLANTEAMIENTO DEL PROBLEMA El cultivo de conchas de abanico es una actividad económica importante, en el periodo de enero a Setiembre del 2013 se obtuvo una producción de 45,284 toneladas (Flores y Mazza, 2014). La acuicultura en Perú se ha incrementado en 20% durante los últimos años, donde destaca la producción de esta especie (Bernedo, León, Montero y Quispe, 2015). Lamentablemente, se conoce poco acerca de los parásitos que afectan a los moluscos en América Latina (Cáceres- Martínez y Vásquez-Yeomans, 2008) y cualquier brote de enfermedad podría poner en peligro esta industria. Es por ello necesario el conocimiento de parásitos y patógenos que afectan a esta especie marina de importancia comercial para el país. 4 III. REVISIÓN BIBLIOGRÁFICA 3.1 ACTIVIDAD COMERCIAL DE LOS MOLUSCOS BIVALVOS Los moluscos bivalvos, donde se incluyen a las ostras, mejillones, almejas y vieras, constituyen una parte importante de la producción acuícola a nivel mundial. Se ha observado un considerable aumento en la producción de bivalvos durante los años de 1991 – 2000, pasando de los 6,3 millones de toneladas desembarcadas a más del doble con 14 204 152 toneladas métricas, incluyendo a especies de pesca y acuicultura. Está producción desde el año 1991 se ha venido incrementando incluso llegando a superar a la pesca (FAO, 2006). Figura 1. Producción (en millones de toneladas) de bivalvos procedentes de la pesca y de la acuicultura durante el decenio 1991-2000. Fuente: Anuarios de Estadísticas de Pesca de la FAO (2006) 5 Los moluscos bivalvos son ideales para la acuicultura, debido a que su alimentación está basada en algas, las cuales que se encuentran en aguas marinas. Aunque el cultivo de estos animales data de hace varios siglos, los últimos avances tecnológicos han permitido maximizar la producción del cultivo de moluscos bivalvos (Helm, Bourne y Lovatelli, 2006). 3.1.1 Producción Nacional 3.1.1.1 Pesca 3.1.1.1.1 Desembarque La concha de abanico representó un 0.6% de todas las especies desembarcadas en el año 2015, este año se colectó en total 30 396 TM procedentes de la actividad extractiva, es decir, no provenientes de la acuicultura. Gran parte del total de este recurso marino (28 904 TM) fue congelada, la cantidad restante (1 492 TM) fue vendida como producto fresco y utilizado para consumo humano directo (Bernedo et al., 2015). 3.1.1.1.2 Desenvolvimiento Chimbote es uno de los lugares que presenta mayor desembarque de recursos hidrobiológicos marítimos, esta ciudad posee el 11.28% del total de los recursos desembarcados en el 2015 (Bernedo, et al., 2015). 3.1.1.1.3 Mercado Interno En el mercado mayorista pesquero de Ventanilla todos los años ha habido ingreso y expendio de concha de abanico, situación que no ocurre en elde Villa María del triunfo, donde el ingreso de este producto es muy escaso llegando en algunos años a no ofrecer (Bernedo et al., 2015). 6 3.1.1.2 Acuicultura La cosecha de conchas de abanico procedente de la acuicultura desde el año 2006 supera las 10 000 toneladas métricas (tabla 1). El año 2015, en el departamento de Áncash se cosecharon 10 833,393 TM (47.61%), en Piura 11 891,53 TM (52.26%) y en Ica 303,06 TM (0.13%) (Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola, 2015). Tabla 1. Cosecha de conchas de abanico procedentes de la actividad de acuicultura en el 2006-2015 (Bernedo et al., 2015). Año 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013 2014 2015 Concha de abanico (TM) 12 337 18 518 14 802 16 047 58 101 52 213 24 782 67 694 55 096 23 029 Con respecto a la venta interna, en el año 2015 fue 2 000,04 TM, representando un 4.24% (Figura 2) del total de recursos marítimos de la acuicultura que fueron vendidos al mercado nacional (Bernedo et al., 2015). Figura 2. Venta Interna de Recursos marítimos procedentes de la actividad de Acuicultura en el año 2015. Fuente: Anuario Estadístico Pesquero y Acuícola, 2015. 7 3.1.1.2.1 Exportaciones La concha de abanico se ubica como el segundo producto acuícola con mayor exportación, representando el 24.17% del total de todas las especies que son exportadas (Figura. 3) (Bernedo et al., 2015). Figura 3. Exportación de recursos hidrobiológicos procedentes de la actividad de acuicultura según especie (PRODUCE, 2015) Fuente: (Bernedo et al., 2015). La concha de abanico se exporta principalmente a Europa, África y Oceanía (Figura 4). El principal destino europeo es Francia y en el 2015 se exportó 3 852,51 TM (Bernedo et al., 2015). 3.1.1.3 Mercado nacional La demanda de concha de abanico en el marcado nacional es muy poca cuando se compara con el mercado internacional, donde los principales países a los cuales se exporta dicho producto son: Francia y Estados Unidos, es decir gran parte de la producción es vendida a estos países y solo una pequeña parte se queda en nuestro país y es distribuida en los terminales pequeros, supermercados y mercados municipales (Kanagusuku, 2009). 8 Figura 4. Exportación de concha de abanico procedente de la acuicultura y país de destino (PRODUCE, 2015). Fuente: (Bernedo et al., 2015). 9 3.2 CONCHA DE ABANICO (Argopecten purpuratus) 3.2.1 Clasificación Taxonómica Reino : Animal Phylum : Mollusca Clase : Bivalva Orden : Anisomyaria Familia : Pectinidae Género : Argopecten Especie : Argopecten purpuratus (Lamarck, 1819) Figura 5. Concha de abanico (Argopecten purpuratus, Lamarck 1989). Fuente: FAO (2007). Recibe diferentes nombres como: Concha de abanico, viera, peine, ostión del norte, almeja voladora. 3.2.2 Distribución La concha de abanico, se encuentra en las costas del Pacífico, desde Paita (Perú) hasta el Norte de Chile en Coquimbo (Álamo y Valdivieso, 1987). Tiene como hábitat el sustrato arenoso, areno fangoso y de conchuela y se les puede encontrar hasta una profundidad de 40 metros debajo del nivel del mar (Uriarte, 2008). 10 3.2.3 Morfología Este pectinido es caracterizado por presentar una concha orbicular, con valvas desiguales, cuya valva izquierda es mucho más convexa que la derecha. A su vez presenta costillas radiales con un número variable de 23 a 26 por valva, la cual presentan una coloración rosácea. (Kanagusuku, 2009). 3.2.4 Alimentación Estos animales son exclusivamente filtradores, se alimentan filtrando gran cantidad de fitoplancton, en épocas donde el fitoplancton desaparece, casi la totalidad de los moluscos bivalvos migra o muere por inanición. Las especies de las cuales se alimenta está conformada principalmente por microalgas pardas o diatomeas, destacando: Isochrysis sp., Chaetoceros sp., Skeletonema sp., Navicula sp., Nitzschia sp., Thalassiosira sp., Melosita sp., Cyclotella sp., entre otras (Kanagusuku, 2009). 3.2.5 Reproducción Es una especie hermafrodita, quiere decir que un mismo individuo posee los dos sexos: masculino y femenino, pero su funcionalidad no es suficiente, por ello, la producción de gametos sexuales es de forma alternada y su ciclo reproductivo de manera continua. Las gónadas reciben el nombre común de coral, este incluye el órgano sexual masculino (color blanco) y el órgano sexual femenino (color naranja) (figura 6) (Peteiro, Filgueira y Fernández, 2007). 11 Figura 6. Órganos internos de Argopecten sp. (Flecha azul) órgano reproductor femenino. (Flecha negra) órgano reproductor masculino. Fuente: Helm et al. (2006) Su primera madurez sexual se puede dar alrededor de los 10 a 12 meses de edad con tallas de 50 mm donde podrían desovar de 1 a 10 millones de óvulos, la producción de los óvulos está relacionada directamente con su crecimiento, es decir, animales de tallas más grandes pueden llegar a desovar 10 a 40 millones de óvulos. El desove generalmente se inicia expulsando al exterior los espermatozoides y luego los óvulos (Kanagusuku, 2009). Su ciclo biológico comprende 4 etapas: huevo; larva, en esta fase se presentan 3 estadios (trocofera, veliger y preveliger), juvenil y adulto (Kanagusuku, 2009). 3.2.6 Condiciones de cultivo Las condiciones necesarias para el cultivo de concha de abanico son una temperatura que va desde los 13°C a 20°C, dándole un medio confortable, aunque también puede llegar a soportar extremos de 7°C hasta 28°C, en cuanto a valores de oxigeno lo ideal es de 0.2 a 8 ml/l, un pH de 6.8 a 7.9 y una salinidad óptima de 35 partes por millón (Kanagusuku, 2009). 3.2.7 Tipos de cultivo de concha de abanico 3.2.7.1 Cultivo de fondo En esta técnica de cultivo se utiliza el fondo marino como soporte para el cultivo. Se realiza el cultivo en un corral de malla que tiene forma circular o rectangular en el fondo y cuya parte basal va pegada al fondo se le hace como una especie de 12 bolsillo donde se colocan piedras para dar soporte y evitar que se mueva (Kanagusuku, 2009). 3.2.7.2 Cultivo suspendido Hay diversas técnicas, pero la más usada es el long-line, el cual consta de una línea de cordel que tiene boyas de diferentes tipos y tamaños para contrarrestar el peso de las conchas de abanico, las cuales se encuentran en linternas. Las líneas poseen cordeles amarrados a los muertos, los cuales son estructuras pesadas que provocan que las líneas ingresen al fondo del mar (Kanagusuku, 2009). 3.3 BAHÍA DE SAMANCO La bahía de Samanco se encuentra ubicado en la provincia de El Santa en la región Ancash, es una de las bahías más importantes , comprendiendo un área de aproximadamente 6900 ha. La circulación de sus aguas es muy lenta con velocidades de 1.2 a 13.9 cm/ s y en un sentido horario. En esta bahía se realiza pesca artesanal donde destacan principalmente son concha de abanico, marucha, navajuela, calamar, pata de mula, pejerrey, machete y lisa. Esta bahía debido a sus características ambientales, batimetría y sustrato brinda condiciones favorables para el desarrollo de cultivo de especies marinas, es por ello que un 30% del área ha sido otorgada a concesiones para el cultivo y explotación de concha de abanico, pero debido a ello surgió un problema debido a que los centros de producción ubicados en esta bahía están produciendo desechos orgánicos. La actividad humana está generando residuos orgánicos como resultado de la propia explotación productiva como el desvalvado, la limpieza de las linternas, sino que además algunas empresas no cuentan con lugares apropiados para acopiar los residuos producidos por el propio personal de trabajo y todo ello es arrojado al mar. Esto es indicación del 13 mal manejo de residuos sólidos por parte de las concesionarias dedicadas a la maricultura. A su vez también se han encontrado concentraciones de metales pesados que no superaron niveles alarmantes como cadmio, plomo y cobre en el agua y en los organismos marinos, pero en los sedimentos superficiales se encontró cadmio y cobre que si superaron niveles estándar. Estos metales estarían llegando al mar de la bahía de Samanco por la actividad antropogénica, como es el uso de los combustibles en la maricultura, pesca industrial y artesanal (IMARPE, 2008; García, Orozco, Gonzales y Flores, 2015; Veyalarce, 2016). 3.4 ANATOMÍA, FISIOLOGÍA E HISTOLOGÍA DE LOS PRINCIPALES ORGANOS DE MOLUSCOS BIVALVOS. 3.4.1 Anatomía y fisiología de los principales órganos de moluscos bivalvos Las branquias están formadas por filamentos, los cuales están cubiertos por cilios. Este órgano está involucrado en la respiración y la alimentación de las especies. En la respiración ya que aquí se realiza el intercambio gaseoso, con respecto a la alimentación estas estructuras permiten atrapar las partículas que se encuentran en suspensión en el ambiente marino y luego son transportadas hacia el orificio bucal con ayuda de los cilios que poseen (Peteiro et al., 2007). El estómago recibe el alimento ingerido y se da inicio al proceso digestivo, posee una glándula digestiva que digiere partículas más pequeñas mientras el intestino se encarga de las partículas más grandes. El intestino tiene una abertura en el segmento final por donde son expulsados los desechos (Peteiro et al., 2007). Las almejas y los mejillones presentan dos porciones de músculos aductores y reciben el nombre de dimiarias, para el caso de vieiras y ostras, estas solo poseen un único músculo aductor, el cual se encuentra ubicado en posición central, estas 14 especies reciben el nombre de monomiarias. En las especies que solo poseen un solo músculo se puede apreciar fácilmente la división, la gran porción es llamada de músculo rápido y se contrae para cerrar las valvas y la porción más pequeña conocida como músculo de cierre, mantiene las valvas en posición cuando se ha cerrado (Helm et al., 2006). Los moluscos tienen una circulación abierta, quiere decir que el tipo de sangre no se encuentra definida por vasos sanguíneos como venas y arterías. La sangre de estos animales recibe el nombre de hemolinfa y es responsable de transportar alimentos, oxígeno y desechos del metabolismo (Peteiro et al., 2007). El sistema nervioso de estos animales está formado por tres pares de ganglios y un par de largos cordones nerviosos. Los ganglios cerebro pleurales envían nervios a los palpos, al musculo aductor anterior y al manto. Los ganglios viscerales proyectan nervios al tubo digestivo, corazón, branquias, manto, musculo aductor posterior. El ganglio pedio inerva el pie (Peteiro et al., 2007). Los órganos encargados de la sensibilidad se encuentran alrededor del manto y son: los ocelos, que son órganos fotorreceptores y el osfradio, que detecta la calidad de agua del ambiente en el que habitan (Peteiro et al., 2007). La gran mayoría de las especies de moluscos bivalvos son hermafroditas. Las gónadas sexuales son liberadas al exterior es por ello que la fecundación es externa 15 Figura 7. Ciclo biológico de la concha de abanico. Fuente: http://conchasdeabanicoupc.blogspot.pe/2010/05/estados-de-desarrollo_04.html. (2010). 3.4.2 Histología de los principales órganos de moluscos bivalvos 3.4.2.1 Branquias Como todas las mucosas con función respiratoria, las branquias están formadas por dos tipos de células: las vibrátiles y las glandulares mucosas, las cuales se asemejan a las células caliciformes de los vertebrados. La proporción entre estas dos células es variable y depende de la salinidad del agua, es por ello que es necesario tener presente este factor variable. Estos dos tipos de células se encuentran sobre una lámina basal desarrollada, la cual presenta alteraciones y migraciones de elementos celulares en casos de parasitosis causadas por tremátodos, copépodos y protozoos (Bozzo, Durfort, Poquet y Sagristà, 2015). 3.4.2.2 Músculo aductor El músculo de los bivalvos presenta dos porciones que difieren en cuanto a histología y funcionalidad, fibras musculares y fibras lisas. Una parte llamada “músculo lento” posee fibras musculares lisas y la otra parte conformada por fibras que poseen estrías recibe el nombre de “músculo rápido” (Chantler, 2016). http://conchasdeabanicoupc.blogspot.pe/2010/05/estados-de-desarrollo_04.html http://conchasdeabanicoupc.blogspot.pe/2010/05/estados-de-desarrollo_04.html 16 3.4.2.3 Gónadas Estos órganos constituyen cerca del 80% del peso corporal y se reducen después de la liberación de sus gametos. Entre los túbulos seminíferos y los folículos ováricos hay una cantidad de tejido conjuntivo laxo, las células adipogranulosas, una gran cantidad de vasos hemolinfáticos y gonoductos ciliados y sinuosos que se distribuyen por toda la gónada. Gónada femenina, compuesta por folículos ováricos, contienen un número grande de oocitos, los cuales están rodeados por tejido conjuntivo laxo y algunas células adipogranulosas. Gónada masculina, está compuesta por compartimentos en donde tiene lugar la formación de los espermatozoides. Entre los compartimentos se observa la presencia de tejido con- juntivo (Bozzo et al., 2015). 3.4.2.4 Manto Está recubierto por un epitelio ciliado con células mucosas y en la zona interna se localiza el tejido conjuntivo alveolar y haces de fibras musculares (Bozzo et al., 2015). 3.4.2.5 Glándula digestiva Presenta un aspecto glandular tubular ramificado. Presenta numerosos túbulos digestivos, separados por tejido conjuntivo alveolar (Bozzo et al., 2015). 3.4.2.6 Intestino Presenta epitelio ciliado que descansa sobre una lámina basal (lb), en la zona apical del epitelio se observan los cilios. Los túbulos digestivos de la glándula digestiva se localizan alrededor del intestino (Bozzo et al., 2015). 17 3.4.2.7 Riñones o Nefridios Conformado por los túbulos renales que a su vez están formados por un epitelio de células con aspecto alveolar (Bozzo et al., 2015). 3.5 SISTEMA INMUNE DE MOLUSCOS Los moluscos bivalvos tienen mecanismos de defensa muy sofisticados, de los cuales se conoce solo algunos. En ese sentido juegan un papel importante los hemocitos, que emigran desde los vasos hemolinfáticos y se dirigen por el tejido conjuntivo hasta llegar a los focos infecciosos. Existen reacciones inflamatorias como la fagocitosis, formación de una cubierta hemocítica y procesos de encapsulación (Bozzo et al., 2015). El sistema inmune está provisto por barreras físicas como el mucus y la propia concha, así como el sistema inmune innato celular y humoral (Moreira, 2015). 3.5.1 Inmunidad celular Esta respuesta está directamente relacionada con los hemocitos, los cuales tiene como función eliminar las células o partículas extrañas mediante la fagocitosis o por medio de las enzimas liberadas por los lisosomas. Los hemocitos también tienen como función: formación de agregados para atrapar a las partículas no propias, la producción y regulación de los factores humorales (Ratcliffe, Rowley, Fitzgerald y Rhodes, 1985) o el aislamiento del patógeno mediante encapsulación (Feng, 1988). 3.5.2 Inmunidad humoral Conformado por proteínas o glicoproteínas que se encuentran la linfa o en los propios hemocitos (Moreira, 2015). Sus principales componentes son: 3.5.2.1 Lisozima Enzimas liberadas en respuesta a infecciones de tipo bacteriana (Zhao et al., 2010) 18 3.5.2.2 Lectinas Proteínas de unión a carbohidratos y que tienen capacidad de opsonización y aglutinación, también favorecen a la fagocitosis y activación del complemento (Humphries y Yoshino, 2003). 3.5.2.3 Proteínas de choque térmico Son sintetizadas como respuesta a factores de estrés y es posible que modulen la apoptosis y afecten la transcripción de genes involucrados en la respuesta inmunitaria (Parcellier, Gurbuxani, Schmitt, Solary y Garrido, 2003; Guo et al., 2009). 3.5.2.4 Sistema profenol-oxidasa Relacionado a la fagocitosis, encapsulación y producción de factores líticos. (Cerenius, Lee y Söderhäll, 2008). 3.5.2.5 Péptidos antimicrobianos Proteínas pequeñas con un papel clave en la inmunidad innata. Alteran la permeabilidad de la membrana de los agentes patógenos, causando la lisis de sus células. 4 grupos de péptidos antimicrobianos en bivalvos: defensinas, mitilinas, mitimicinas y miticinas (Li, Parisi, Parrinello, Cammarata y Roch, 2011). Se han descrito otros nuevos grupos de péptidos antimicrobianos: grandes defensinas, mitimacinas (Gerdol, De Moro, Manfrin, Venier y Pallavicini, 2012), miticusinas (Liao, Wang, Liu, Fan, Sun y Shen, 2013) y mitiquitinas (Qin et al., 2014). 3.6 ENFERMEDADES DE MOLUSCOS BIVALVOS Y ANTECEDENTES Los bivalvos son afectados por bacterias, virus, clamidias, fases larvarias de tremátodos y protozoos, así como adultos de copépodos. Los órganos preferidos 19 para infectar son: el tracto digestivo, las branquias, la glándula hepatopancreática, las gónadas y musculatura (Bozzo et al., 2015). Es importante describir que existen moluscos muy parasitados pero que macroscópicamente presentan un aspecto normal por lo cual es necesaria una observación vital al microscopio de una pequeña sección de los órganos para poder notar la presencia de los parásitos y las alteraciones tisulares que ha provocado (Bozzo et al., 2015). La investigación en enfermedades de moluscos ha estado enfocada principalmente a los estudios de morfología del patógeno y su ultraestructura, los efectos de factores medioambientales sobre los patógenos y su infectividad, así como en el desarrollo de técnicas de diagnóstico basadas en biología molecular. Uno de los principales desafíos a los que se enfrenta el cultivo de moluscos bivalvos es el control y prevención de enfermedades. En cultivos intensivos es donde se encuentran animales más susceptibles, estos moluscos suelen estar más expuestos a la aparición y desarrollo de diferentes enfermedades debido al aumento en las densidades y al estrés generado que provoca una rápida transmisión del agente (Figueras y Novoa, 2011). La mayoría de las enfermedades de moluscos de reporte obligatorio son enfermedades causadas por protozoos (Figueras y Novoa, 2011). Con el fin de controlar la presentación de los distintos patógenos de declaración obligatoria se llevan a cabos programas de monitoreo basados en diversas técnicas de diagnóstico aprobadas por la OIE (Figueras y Novoa, 2011). Las enfermedades de moluscos bivalvos se han estudiado tradicionalmente empleando citología e histología, las cuales han sido muy buenas para detectar posibles patógenos, específicamente los parásitos protozoos asociados a 20 mortalidades o alteraciones en la población afectada a su vez también permite detectar lesiones y la interacción del patógeno con el sistema inmune (Figueras y Novoa, 2011). 3.7 PRINCIPALES ENFERMEDADES DE MOLUSCOS BIVALVOS 3.7.1 Enfermedades Bacterianas Uno de los grandes problemas que causan gran daño a la acuicultura de moluscos bivalvos son los repetidos casos de mortalidad, muchos de estos casos se deben a agentes bacterianos, destacando entre ellos a miembros del género Vibrio (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.1.1 Infecciones por bacterias del género Vibrio Este género bacteriano incluye a muchos de los patógenos de acuicultura marina. Este agente microbiano está relacionado a los problemas en cultivos larvarios de bivalvos. Los signos que se observan son distención y desprendimiento del manto, así como la aparición de estrías en el cuerpo, ocasionando mortalidad por encima del 70%. La enfermedad se manifiesta a las 4 – 5 horas post infección, con signos clínicos como: reducción de la movilidad y tendencia a permanecer quiescentes, con el velo extendido, recibe el nombre de necrosis bacilar. A las 8 horas se observa muerte con necrosis granular en los individuos (Figueras y Novoa, 2011). La especie V. alginolyticus ha sido identificada como responsable de provocar mortalidad en Nodipecten subnodosus, Atrina Maura (Luna-Gonzales y Maeda- Martínez, 2004) y Ruditapeus decussatus (Gomez-León, Villamil, Lemos, Novoay y Figueras, 2005). 21 La especie V. angillarum se considera patógena para Argopecten purpuratus (Riquelme, Hayashida, Toranzo, Vilches y Chávez, 1995) mientras V. splendidus han sido descrito como patógeno de Crasosstrea virginica (Sugumar, Nakai, Hirata, Matsubaray y Muroga, 1998) y Ruditapeus decussatus (Gomez- León et al., 2005). 3.7.1.2 Infecciones por bacterias del género Pseudomonas Esta bacteria afecta principalmente al estadio larvario de los moluscos, provocando un desarrollo anormal y mortalidad. Este agente microbiano se ha aislado con bacterias del género Vibrio sp. lo que sugiere la posibilidad de una asociación conjunta, se cree que los que inician la enfermedad son los Vibrios sp. y estos permiten el ingreso secundario de bacterias con alta capacidad de metabolizar el sustrato, como son las Pseudomonas (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.1.3 Infecciones por procariotas de tipo Rickettsia La presencia de microorganismos procariotas ha sido descrita en diferentes invertebrados acuáticos, haciendo pensar que son los posibles causantes de mortalidad en estos animales, pero durante mucho tiempo ha sido controversial si las infecciones causadas por estos agentes producen un daño significativo o relevante en la salud del hospedador. En marzo de 1987 ocurrió una mortalidad masiva, de aproximadamente 40%, en la especie Pecten maximus en Francia, ese estudio reveló la presencia de infecciones por este agente en las branquias (Le Gall, Chagot, Mialhe y Grizel 1988). Estos microorganismos aparecen formando colonias intracelulares basófilas, pudiendo llegar a causar obstrucción de los vasos sanguíneos (Le Gall et al., 1988). 22 Estos organismos tipo Rickettsia en moluscos son parásitos obligados, forman inclusiones citoplasmáticas, las cuales se pueden observar mediante histología. Se ha observado que también existen inclusiones con carácter eosinófilo e incluso en un mismo hospedador se puede observar inclusiones con ambas tinciones (Meyers, Burreson, Barber y Mann, 1991; Norton, Shepherd, Abdon-Naguit y Lindsay, 1993; Wen, Kou y Chen, 1994). Se sugiere que podría tratarse de diferencias entre especies o una diferencia entre sus estadios (Sun y Wu, 2004). Las rickettsias no matan a las células de su hospedador por producción de toxinas sino por destrucción celular (Winkler, 1990; Romero, Thumbull y Jiménez, 2000), esto se relaciona con los resultados de algunos trabajos realizados con moluscos, los cuales describen células infectadas con estos organismos tipo rickettsiales, así como la ruptura de las células para la liberación de su progenie. (Villalba, Carballal, López, Cabada y Corral, 1999; Figueras y Novoa, 2011). 3.7.2 Enfermedades Virales Los bivalvos al ser organismos filtradores pueden acumular patógenos, algunos de los cuales pueden ser virus, estos microbios no solo les afectan a ellos también pueden causar daño a otros animales (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.2.1 Birnavirus Los birnavirus infectan a distintas especies, desde vertebrados hasta moluscos e insectos (Delmas et al., 2005). Es un virus con genoma RNA de doble cadena. Los moluscos pueden actuar como reservorios ya que se ha aislado birnavirus de animales aparentemente sanos (Rivas et al. 1993), incluso se encontró que los virus se mantienen en los hemocitos durante el período de verano para en invierno replicarse e invadir las células parenquimales (Kitamura, Jung y Suzuki, 2000). 23 3.7.2.3 Herpesvirus Es el virus de molusco más estudiado y del cual se ha secuenciado su genoma (Davison, 2005). Los herpersvirus son virus DNA, tienen una forma poligonal y se replican en el núcleo de las células a la que invaden. Estos virus están asociados a mortalidad de larvas de Crassostrea gigas en Nueva Zelanda (Hine, Wesney y Hay, 1992) y en Estados Unidos (Burge, Griffin y Friedman, 2006). Se han encontrado tres tipos genéticos distintos de herpesvirus en un estudio patológico llevado en Crassotrea ariakensis en Asia (Moss et al., 2007). Las larvas afectadas por infecciones con estos virus muestran una reducción en la alimentación y el nado, además se observan lesiones en el manto y velo. Las especies adultas no son tan susceptibles a las infecciones por herpesvirus, sin embargo, se cree que podrían actuar como portadores asintomáticos, ya que se ha encontrado la presencia en ostras adultas (Arzul et al., 2002). 3.7.2.4 Iridovirus Los iridovirus son virus con genoma DNA y presentan forma icosaédrica, están asociados a mortalidades de moluscos bivalvos en varios países, por ejemplo, en Francia, se describió una enfermedad de las branquias causada por el virus de la necrosis branquial (GNV, gill necrosis virus) en Crassotrea angulata (Comps, Bonami, Vago y Capillo, 1976; Comps y Bonami 1977, Comps, Herbaut y Fougerousse, 1999). Otra enfermedad relacionada con el iridovirus es: la enfermedad del velo de las larvas (OVVD, oyster velar virus disease) (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.3. Enfermedades Parasitarias 24 3.7.3.1 Perkinsus sp. El género Perkinsus, comprende parásitos protozoarios de moluscos bivalvos marinos, se encuentran distribuidos a nivel mundial en América, África, Europa, Asia y Oceanía, existen especies dentro de este grupo que ocasionan elevadas mortalidades (Figueras y Novoa, 2011). Existen 7 especies dentro del género: siendo P marinus y P olseni, incluidos en la lista de las especies de reporte obligatorio (OIE, 2017). Los trofozoítos que se encuentran en el hospedador, cuando este muere, se transforman en hipnoesporas y cuando estas últimas se transfieren al agua de mar se produce la zooesporulación que conduce a la liberación de las zooesporas móviles. Los tres estadios de ciclo de vida (trofozoíto, hipnoespora y zooespora) son capaces de producir infección en moluscos sanos (Figueras y Novoa, 2011). Los métodos de diagnóstico disponible incluyen a la histología, incubación en caldo tioglicolato y técnicas moleculares (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.3.2 Bonamia sp. Los parásitos del género Bonamia agrupan a parásitos protozoarios que infectan a varias especies de ostras. Parte de su ciclo de vida incluye a células uninucleadas de pequeño tamaño, llamadas microcélulas, que invaden y proliferan en los hemocitos de los moluscos, lo que ocasiona ruptura de estos y liberación de los parásitos los cuales son nuevamente fagocitados por otros hemocitos (Figueras y Novoa, 2011). Bonamia ostreae es el agente patógeno que infecta a diversas especies de ostras como: Ostrea chilensis, Ostrea pulcheana, Ostrea angasi, Ostrea edulis, causando 25 grandes mortalidades en la costa atlántica europea y norteamericana (Figueras y Novoa, 2011). Este parásito es diagnosticado mediante histología, el cual es observado como como una inclusión citoplasmática con un diámetro de 1 – 3 µm (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.3.3 Phylum Paramyxea Los parásitos de moluscos bivalvos que pertenecen al Phylum Paramyxea se encuentran en el grupo de parásitos de importancia a nivel mundial. Dentro de este gran grupo se incluye a dos géneros que afectan a los moluscos: género Marteilia y el género Marteiloides. Los parásitos más estudiados son: Marteilia refringens y Marteilia sydneyi (Figueras y Novoa, 2011). Marteilia sydneyi es la responsable de la enfermedad QX en la ostra Saccostrea glomerata mientras Marteilia refringens es el agente que provoca altas mortalidades en la ostra plana, Ostrea edulis (Figueras y Novoa, 2011). Este parásito ha causado grandes mortalidades conllevando a pérdidas económicas importantes en la acuicultura, por eso en la actualidad es un patógeno de declaración obligatoria listado por la Organización Mundial de Sanidad Animal (OIE, 2017). Marteiliodes branchialis fue descubierta en Australia en Saccostrea glomerata (Anderson, Adlard y Lester, 1992), este parásito causa lesiones focales, provocando reducción del crecimiento y en algunos casos mortalidad. En cuanto al diagnóstico, son parásitos de fácil reconocimiento mediante histología o citología. Sin embargo, se pueden usar técnicas moleculares para distinguir las especies. Para el correcto diagnóstico de estos parásitos se recomienda uso de técnicas de control y vigilancia (OIE, 2017). 26 3.7.3.5 Enfermedad causada por Metazoos Los metazoos que causan daños en los bivalvos cultivados son muy diversos, se incluye desde poliquetos hasta helmintos tremátodos. 3.7.3.5.1 Poliquetos Este grupo está formado por anélidos que viven en ambientes marinos. La principal familia que afecta a los bivalvos es la Spionidae, y dentro de esta familia los principales géneros son: Polydora, Dipolydora y Bocardia. Estas especies tienen la capacidad de perforar sustratos calcáreos como las valvas de los moluscos (Martin y Britayev, 1998). Poseen una distribución mundial en zonas costeras, aunque algunas especies están ubicadas solo en algunas áreas (Rohde, 2005). Muchos moluscos bivalvos han sido encontrados afectados por estos polidóridos entre ellos: Crassostrea spp., Ostrea spp., Saccostrea comerciales, Tioestrea chilensis, Mytilus edulis, Ruditapes phillinarum, Chione spp., Mesodesma donacium, Mulinia sp. Patinopecten yessoensis, Crassedoma giganteum, Placopecten magellanicus, Argopecten purpuratus y Aquipecten tehuelchus. (Boscolo y Giovanardi, 2002; Bower y McGladerry, 1994; Cáceres-Martínez, Tinoco, Unzueta-Bustamante y Gómez-Humaran, 1999; Ciocco, 1990; Lauckner, 1983; Murina y Solonchenko, 1991; Oliva y Sánchez, 2005; Radashevsky, Lanay y Nalesso, 2006). La mayoría de las infecciones causadas por este tipo de parásitos no causan gran daño, especialmente cuando la intensidad es baja y las perforaciones solo se encuentran a nivel valvar. (Figueras y Novoa, 2011). En algunos casos los problemas son más severos, en Europa se ha registrado en mejillones: mortalidades, bajo índice de condición, así como la pérdida de su valor comercial por 27 infestaciones con Polydora calcarea (Bower y Mc Gladdery, 1994; Lauckner, 1983). 3.7.3.5.2 Turbelarios Conocidos como planarias, son un grupo de animales que pertenecen al filo platelminto. Las especies que se han encontrado en moluscos bivalvos son de la familia Urastomidae y Graffilidae (Lauckner, 1983; Rohde, 2005). Los turbelarios habitan principalmente el tracto digestivo y las branquias de especies de importancia comercial como: Crassostrea virginica, Crassostrea gigas, Ostrea edulis, así como también pectínidos, mejillones y almejas. (Bower y Mc Gladery, 1994). Urastoma cyprinae es uno de los parásitos más reportados en branquias de estos animales marinos (Rohde, 2005). Si bien antes se consideraba a este parásito como un comensal inofensivo, investigaciones posteriores demostraron que es un patógeno, el área de branquias afectadas por U. cyprinae muestra necrosis, infiltración hemocítica, reducción del espacio entre las lamelas (Robledo, Cáceres- Martínez, Sluys y Figueras, 1994). 3.7.3.5.3 Cestodos larvales Estos estadios de cestodos han sido reportados en muchos invertebrados marinos, así como en peces provenientes de diferentes lugares del mundo. Los adultos frecuentemente se encuentran en elasmobranquios. Se conoce muy poco de los ciclos de vida de estos parásitos, pero se cree que actuarían como hospedador intermediario (Figueras y Novoa, 2011). Las larvas de cestodos que parasitan a bivalvos se encuentran en diversas partes del mundo, pero con mayor frecuencia en aguas cálidas, esto debido a que los elasmobranquios, hospederos definitivos, 28 habitan en estos ambientes (Lauckner, 1983). La mayoría de estudios solo han descrito la presencia de los cestodos, pero no han investigado acerca de la patología que ocasionan (Figueras y Novoa, 2011). 3.7.3.5.4 Tremátodos digeneos Los digeneos en estadio larval son los parásitos metazoos más importantes de los moluscos bivalvos debido a que son capaces de provocar severos daños. Los moluscos pueden ser primeros o segundos hospederos intermediarios. En el caso que actúen como primeros hospederos intermediarios se encontrarán los estadios de los tremátodos que se reproducen asexualmente, como es el caso de los esporocistos. La infección en estos casos conlleva a la muerte debido a que los esporocistos dañan tejidos del hospedador como gónadas (Figueras y Novoa, 2011). Si su papel dentro del ciclo evolutivo es ser segundo hospedero intermediario albergarán metacercarias que usualmente se encuentran enquistadas. La patología que causa depende del parásito y del hospedador, así como de la intensidad parasitaria (Figueras y Novoa, 2011). El grado de infección de estos agentes patógenos está relacionado con las especies, el ambiente y la estación. Un factor determinante para la transmisión de estos parásitos es la presencia de los hospederos definitivos que pueden ser peces o aves marinas (Galaktionov y Dobovolskij, 2003; Rohde, 2005). Los principales digeneos son los de la familia Gymnophallidae, y sus metacercarias suelen presentarse en mayor número y con mayores prevalencias que las de otras familias. La prevalencia e intensidad está relacionada a la edad de los bivalvos (Cremonte, 1999). 29 Algunas metacercarias tienen importancia en la salud pública. En Corea existe una zoonosis provocada por el consumo de ostras crudas infectadas con metacercarias de parásitos pertenecientes a la familia Gymnophallidae (Lee, Chai y Hong, 1993; Lee, Sohn, Wong, Hun y Seo, 1996). 3.7.3.5.5 Nematodos larvales Estos tipos de parásitos son un grupo muy numeroso y variado, pero no son encontrados frecuentemente en moluscos bivalvos. Unas pocas especies de Ascaridoidea y Spirurida utilizan a estos organismos como hospederos intermediarios. Dentro de los Ascaridoidea, Sulcascaris sulcata es la única especie reportada en moluscos bivalvos (Figueiras y Novoa, 2011). Este parásito se encuentra distribuido en aguas cálidas, y su estadio adulto parasita el estómago de las tortugas Caretta caretta y Chelonia mydas, las cuales adquieren el parásito cuando consumen los moluscos bivalvos contaminados (Anderson, 2000). Con respecto al grupo de Spirurida, los estadios larvales del género Echinocephalus sp. se han encontrado en: Crassostrea gigas, Amusium balloti y abalones, el estadio adulto parasita elasmobranquios los cuales adquieren los parásitos cuando consumen a los moluscos infectados (Figueiras y Novoa, 2011). 3.8 ESTADO SANITARIO DE MOLUSCOS BIVALVOS El Estado, a través del Servicio Nacional de Sanidad (SANIPES), es la autoridad competente en el tema sanitario y el ente encargado de evaluar la calidad de los productos pesqueros derivados de la acuicultura. Es así que en el 2004 se aprueba la “Norma Sanitaria de Moluscos Bivalvos Vivos” con el decreto supremo N°07- 2004. El cual tiene por objetivo regular las condiciones y requisitos de seguridad sanitaria y de calidad que deben reunir los moluscos bivalvos destinados 30 directamente al comercio o a su procesamiento para consumo humano, incluyendo los requisitos para las áreas de extracción o recolección y para las concesiones acuícolas (DECRETO SUPREMO Nº 07-2004-PRODUCE) Hasta la actualidad en el país no se han publicado estudios del estado sanitario de los moluscos bivalvos. En países desarrollados existen programas de control y vigilancia de las enfermedades propias de moluscos, que en su mayoría son enfermedades de origen parasitarios. La OIE recomienda realizar estudio de brotes o procedimientos de vigilancias de enfermedades en los moluscos para tener información zoosanitaria significativa de los animales acuáticos (OIE, 2017). 31 IV. JUSTIFICACIÓN DEL ESTUDIO Se conoce poco del estatus sanitario de las conchas de abanico (Argopecten purpuratus), que son moluscos cultivados en zonas del litoral peruano y vendidos no solo a nivel nacional sino también internacional, es por ello que es necesario conocer los agentes parasitarios y las lesiones histopatológicas ocasionadas por estos agentes con el fin de establecer programas de prevención y control de enfermedades en los centros de cultivos evitando las pérdidas económicas causadas por efectos de alguna infección en esta especie acuícola y posibles restricciones comerciales al ser algunos de estos agentes parasitarios de reporte obligatorio ante la OIE. 32 V. OBJETIVOS DEL ESTUDIO 5.1 OBJETIVO GENERAL Detectar los agentes parasitarios y describir las lesiones histopatológicas en la concha de abanico (Argopecten purpuratus) procedentes de Áncash-Perú en periodo de verano e invierno. 5.2 OBJETIVOS ESPECÍFICOS Detectar la presencia de los agentes parasitarios presentes en la concha de abanico procedente de ambientes naturales y centros de producción en el periodo de verano e invierno mediante histología. Caracterizar todas las lesiones presentes en la concha de abanico procedente de ambientes naturales y centros de producción en el periodo de verano e invierno mediante histología. Comparar la prevalencia de los parásitos y las lesiones encontradas entre la estación de verano y la estación de invierno. Comparar la prevalencia de los parásitos y las lesiones encontradas entre población de ambientes naturales y los de producción. 33 VI. METODOLOGÍA 6.1 DISEÑO DEL ESTUDIO El presente estudio es de tipo longitudinal analítico, cuyas variables independientes vienen a ser factores asociados a la presencia de parásitos y lesiones como: el período de estación y la procedencia. La variable dependiente es la frecuencia de parásitos y lesiones en las conchas de abanico. 6.2 POBLACIÓN Y MUESTRA Este estudio se desarrolló utilizando muestras de conchas de abanico (Argopecten purpuratus) de vida libre, así como los de producción, ambos grupos provenían de la bahía de Samanco en la ciudad de Chimbote, Región Áncash en Perú. Las muestras fueron procesadas en el laboratorio de Histología y Parasitología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. Se muestrearon 90 moluscos de la especie concha de abanico (Argopecten purpuratus) por grupo, considerando 4 grupos (conchas de abanico de Ambiente natural en Verano, conchas de abanico de Ambiente natural en Invierno, conchas de abanico de Producción en Verano y conchas de abanico en Invierno), resultando en total 360 animales. 34 El tamaño de muestra por grupo se basó en una frecuencia de 50% de casos esperados, como escenario conservador, un nivel de confianza de 95% y un error aceptado del 10%. 6.3 PROCEDIMIENTOS Y TÉCNICAS 6.3.1 Toma de muestra Los moluscos procedentes de Áncash fueron recolectados sin distinguir individuos clínicamente enfermos de individuos sanos de los dos grupos, el primero proveniente de centros productivos y el otro de animales de vida libre, se realizó la colección de los especímenes tomando en cuenta la estacionalidad de verano (enero, febrero y mazo) e invierno (junio, julio y agosto) del año 2017. En general podemos decir que a lo largo de la costa se presenta pocas precipitaciones, por lo que se decidió separar a los animales en dos grupos con respecto a la temperatura (verano e invierno) y no a la presencia de lluvia (época seca y época húmeda). (SENAMHI, 2018). Para el muestreo de animales de zonas de producción, se tomó animales de linternas provenientes de 3 empresas dedicadas al cultivo de concha de abanico, en el caso de los animales silvestres, estos fueron extraídos de su medio natural mediante buceo. Hubo diferencia en las tallas encontradas en los dos grupos de procedencia, los animales de producción presentaron tallas más uniformes, con un rango de 59 mm -77 mm, en el caso de los animales de medio natural hubo una desuniformidad notoria presentando un rango que va de 42mm a 90 mm. Esto es debido a que los centros de producción manejan animales promedio los cuales cumplen con ciertas medidas biométricas como talla y peso, esto no ocurre en el medio natural, en el cual los animales tienen tallas y pesos diferentes entre sí. 35 Los animales cuanto antes de ser extraídos del agua, para evitar la descomposición del tejido, fueron conservados en cajas de poliestireno que contenían packs de hielo, estas cajas se encontraban bien rotuladas y completamente cerradas para proteger a los moluscos del ingreso del sol y el viento evitando así la deshidratación (OIE, 2017). Las muestras fueron transportadas al laboratorio de Parasitología e histopatología de la Facultad de Medicina Veterinaria de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. 6.4.2 Evaluación de los parámetros fisicoquímicos del agua Se evaluó el factor medioambiental determinando 4 propiedades fisicoquímicas del agua como: temperatura, pH, oxígeno y salinidad. Se utilizó el equipo multiparámetro portátil Hanna Hi 9828 para la evaluación en todos los meses en los cuales se muestreó a las conchas de abanico; es decir en enero, febrero y marzo (temporada de verano) y junio, julio y agosto (temporada de invierno). 6.3.3 Determinación de la biometría Con objetivo de determinar diferencias en las medidas biométricas de la concha de abanico se tomaron en cuenta la procedencia (banco natural y producción), la estación (verano e invierno) así como la presencia de parásitos. Se estimaron el peso total (PT) (incluyendo las valvas), el peso solo de los órganos, la altura valvar (L) y el factor de condición (K). Para determinar la altura valvar se utilizó el vernier y para los pesos se usó una balanza sensible en gramos. El factor de condición o la condición de Fulton (K) se halló usando la relación entre el peso y la longitud (Froese, 2006). 36 Donde (PT) representa: Peso total, (L) representa: altura valvar. 6.3.4 Evaluación Macroscópica Se evaluó a nivel macroscópico los diferentes órganos en búsqueda de alguna lesión evidente, así como la presencia de parásitos que los afecten. El primer órgano que se observó fue la valva, luego se procedió a abrir cuidadosamente las valvas y observar in situ para finalmente evaluar minuciosamente cada uno de los órganos internos (gónada femenina, gónada masculina, manto, branquias, nefridios y tracto digestivo). Se pudo observar cambio en la coloración de los órganos, branquias erosionadas o sucias, edema, abscesos, malformaciones calcáreas (Howard, Lewis, Keller y Smith, 2004). 6.3.5 Estudio Histopatológico Se dividió a la muestra en tres partes mediante dos cortes paralelos, donde la región central fue llevada para estudio histopatológico, de esta manera se logra tener una porción de muestra que incluye los órganos internos de moluscos bivalvos del género Argopecten sp, esta sección incluye órganos como: gónada femenina, gónada masculina, manto, branquias, nefridios y tracto digestivo; esta técnica es descrita en el libro “Técnicas histológicas para moluscos bivalvos marinos y crustáceos del Centro Nacional de Ciencias del Océano Costero de los Estados Unidos de Norteamérica” (Howard, Lewis, Keller y Smith, 2004). Todas las muestras fueron puestas en frascos debidamente rotulados que contenían el fijador liquido de Davidson, luego de 24 horas las muestras fueron puestas en alcohol de 50°C hasta su procesamiento (OIE, 2017). 𝐿3 𝐾 = 𝑃𝑇 𝑥 100 37 Las muestras fueron procesadas en láminas mediante el método convencional histológico para tejidos fijados. Los cortes tuvieron un grosor de 5 µm y se tiñeron con hematoxilina y eosina (Shaw y Battle, 1957). En las 360 láminas se observó los tejidos mediante el uso del microscopio óptico con un aumento de 40X, 100X y 400X. Se determinó e interpretó las lesiones histopatológicas y finalmente para la obtención de las fotos se usó el programa Leyca mycrosistems. Las lesiones histopatológicas fueron clasificadas de acuerdo al grado de afección por su extensión en el tejido evaluado presentándose en una escala de grados que va de 1-4 (Reimshuessel, May, Bennet y Lypsky, 1992), con la finalidad de hacer una evaluación más objetiva. Los parámetros tomados en cuenta figuran en la tabla 2. 38 𝑛° 𝑡𝑜𝑡𝑎𝑙 𝑑𝑒 𝑎𝑛𝑖𝑚𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑓 = 𝑛° 𝑑𝑒 𝐴𝑛𝑖𝑚𝑎𝑙𝑒𝑠 𝑐𝑜𝑛 𝑋 𝑥 100% Tabla 2. Diferencia de grados de lesiones en tejidos según su extensión en la muestra (Reimshuessel et al., 1992). Grado Extensión I (Escaso) Escasa presencia de lesión, hasta un 25% aproximadamente en toda la muestra estudiada II (Leve) Presencia de lesión en más del 25% pero menor del 50% de toda la muestra en estudio III (Moderado) Lesiones encontradas en más del 50% pero menores a un 75% de la muestra estudiada IV (severo) Afección en más del 75% y llegando incluso al 100% de la muestra en estudio. Los resultados fueron presentados con el análisis de frecuencia, indicando el porcentaje de cada variable con respecto al total de población analizada y se graficó estos resultados obtenidos en tablas de porcentajes. La frecuencia fue determinada mediante la fórmula: Donde (x) representa: Una lesión histopatológica determinada. 6.3.6 Plan de análisis Con la información obtenida se creó una base de datos para ser usada en el análisis estadístico. Los datos fueron analizados con la prueba estadística de Ji Cuadrado para demostrar si hay asociación entre el lugar de procedencia, lesiones histopatológicas y los agentes parasitarios encontrados, así como también la relación de estos últimos con la estación del año (verano e invierno). 39 6.3.7 Consideraciones éticas Se trabajó las muestras con la debida autorización de las concesionarias de conchas de cultivo, a su vez se contempló las normas éticas para la investigación señaladas por el Comité de Ética de la Universidad Peruana Cayetano Heredia. 40 VII. RESULTADOS 7.1 Parámetros fisicoquímicos del agua Se midieron los parámetros fisicoquímicos en 6 momentos durante los meses de verano (enero, febrero y marzo), en el mes de febrero se obtuvo la temperatura más alta con 25.76 °C y la mayor cantidad de oxígeno disuelto se encontró en el mes de enero, el cual fue: 8.71 ml/L (Tabla 3). 41 Tabla 3. Evaluación Mensual de los parámetros fisicoquímicos del agua de la bahía de Casma en Áncash-Perú evaluados en la temporada de verano. Estación Mes Número de Medición Temperatura (°C) Salinidad (ups) Promedio pH Promedio Oxígeno disuelto (ml/L) 1 16.85 33.28 8 6.84 2 16.9 33.29 8.08 6.91 3 21.83 33.27 8.27 8.54 Enero 4 21.54 33.24 8.25 8.71 5 16.93 33.20 7.97 4.3 6 20.8 33.24 8.3 8.67 1 25.01 33.29 7.74 5.16 2 25.22 33.22 8.25 5.32 Verano 3 24.54 33.33 7.77 5.21 Febrero 4 25.76 33.25 8.22 6.4 5 24.8 33.27 8.26 5.61 6 25.22 33.25 8.3 5.81 1 16.85 33.28 8 6.84 2 24.41 33.12 8.13 6.54 Marzo 3 24.41 33.12 8.13 6.54 4 26 32.98 8.36 7.43 5 25.51 33.01 8.36 7.23 6 25.3 33 8.25 7.1 Para el caso de los meses de verano (junio, julio y agosto) también se midieron los parámetros fisicoquímicos en 6 momentos, se obtuvo la temperatura más baja con 17.67 °C en el mes de agosto y la mayor cantidad de oxígeno disuelto se encontró también en el mes de agosto, el cual fue:11.38 ml/L (Tabla 4). 42 Tabla 4. Evaluación Mensual de los parámetros fisicoquímicos del agua de la bahía de Casma en Áncash-Perú evaluados en la temporada de invierno. Estación Mes Número de Medición Temperatura (°C) Salinidad (ups) Promedio pH Promedio Oxígeno disuelto (ml/L) 1 19.9 35.06 8.39 7.69 2 19.85 35.05 8.41 8.9 3 19.72 35.04 8.41 9.01 Junio 4 19.63 35.05 8.41 9 5 19.54 35.04 8.48 9.57 6 19.35 35.08 8.35 7.08 1 19.13 33.25 8.324 7.55 2 19.36 33.29 8.31 8.06 Invierno 3 19.38 33.29 8.45 7.73 Julio 4 18.81 33.28 8.51 9.55 5 18.5 33.27 8.47 9.6 6 19.09 33.29 8.49 8.87 1 18.56 33.25 8.18 8.62 2 18.28 33.26 8.51 8.88 Agosto 3 17.77 33.25 8.63 9.19 4 17.72 33.26 8.51 8.51 5 17.67 33.24 9.49 11.38 6 17.72 33.24 9.31 11.25 Para el caso de los promedios se observó la relación inversamente proporcional de la temperatura y el oxígeno disuelto, como se observa en la figura 8, los meses más cálidos (enero, febrero y marzo) presentaron menor cantidad de oxígeno disuelto y en el caso de los meses fríos (junio, julio y agosto) la cantidad de oxígeno disuelto se encontró en mayor cantidad (Tabla 5). 43 5.58 Tabla 5. Promedio y desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos del agua de la bahía de Casma en Áncash-Perú evaluados en la temporada de verano e invierno. Estación Mes Temperatura (°C) DE Temperatura (°C) Salinidad (ups) DE Salinidad (ups) pH DE pH Oxígeno disuelto (ml/L) DE Oxígeno disuelto (ml/L) Enero 19.14 2.45 33.25 0.03 8.14 0.14 7.32 1.71 Verano Febrero 25.09 0.41 33.26 0.03 8.09 0.26 5.58 0.47 Marzo 23.74 3.43 33.08 0.11 8.20 0.14 6.94 0.36 Invierno Junio 19.66 0.20 35.05 0.01 8.40 0.04 8.54 0.94 Julio 19.04 0.33 33.27 0.01 8.42 0.08 8.56 0.90 Agosto 17.95 0.37 33.25 0.008 8.77 0.51 9.63 1.32 Promedio Oxígeno disuelto (ml/L) Promedio Temperatura (°C) 19.14 25.09 23.74 19.66 19.04 17.95 7.32 6.94 8.54 8.56 9.63 Enero Febrero Marzo Junio Julio Agosto Figura 8. Relación de la Temperatura y el oxígeno disuelto en los meses de verano e invierno del agua de la bahía de Casma en Áncash-Perú 44 Figura 9. Promedio y desviación estándar de los parámetros fisicoquímicos en todos los meses. 7.2 Biométricos Hubo diferencia en las tallas encontradas en los dos grupos de procedencia, los animales de producción presentaron tallas más uniformes, con un rango de 59 mm -77 mm, en el caso de los animales de medio natural hubo una desuniformidad notoria presentando un rango que va de 42mm a 90 mm. Esto es debido a que los centros de producción manejan animales promedio los cuales cumplen con ciertas medidas biométricas como talla y peso, esto no ocurre en el medio natural, en el cual los animales tienen tallas y pesos diferentes entre sí. Con respecto al promedio de los datos biométricos de las conchas de abanico se observa que los individuos más grandes y más pesados se obtuvieron del grupo proveniente de Producción en la estación de Invierno y en su contraparte se 40 35 30 25 20 15 10 5 0 promedio promedio Temperatura (°C) Salinidad (ups) Enero 19.14 33.25 Febrero 25.09 33.26 Marzo 23.74 33.08 Junio 19.66 35.05 Julio 19.04 33.27 Agosto 17.95 33.25 promedio pH 8.14 8.09 8.2 8.4 8.42 8.77 promedio oxígeno disuelto (ml/L) 7.32 5.58 6.94 8.54 8.56 9.63 σ: 1.44 σ: 0.25 σ: 2.91 σ: 0.75 45 encontró moluscos bivalvos más pequeños y menos pesados en el grupo de Ambiente natural de la estación de Invierno (Tabla 6). El factor de condición el cual es un dato importante, ya que permite relacionar el tamaño y peso de los individuos, mostró que el grupo proveniente de Ambiente natural en estación de invierno, el cual tenía como promedio menor tamaño tenía una mejor condición (Figura 9). Tabla 6. Promedio de datos biométricos de las conchas de abanico de Áncash-Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (Ambiente natural y Producción), así como la temporada (Verano e Invierno). Grupo de conchas de abanico peso neto (gr) DE peso neto (gr) peso órganos interno (gr) DE peso órganos interno (gr) altura valvar (mm) DE altura valvar (mm) FC DE FC Verano - Producción 48.96 4.43 21.82 2.49 69.34 0.26 14.77 1.81 Verano - Ambiente natural 42.87 20.76 14.23 6.95 61.13 7.75 17.88 3.36 Invierno - Producción 56.75 9.36 27.20 5.18 68.67 3.80 17.53 2.34 Invierno - Ambiente natural 39.76 8.37 14.17 3.23 58.42 4.22 19.85 2.51 46 Figura 10. Relación de la altura valvar y el peso total con el Factor de condición (FC) según los diferentes grupos de procedencia. Promedio altura valvar (mm) Promedio peso neto (gr) promedio FC 69.34 48.96 61.13 42.87 68.67 56.75 58.42 39.76 14.77 17.88 17.53 19.85 Verano - Producción Verano - Ambiente natural Invierno - Producción Inviernto - Ambiente Natural Figura 11. Relación de la altura valvar y el peso total con el Factor de condición (FC) según los diferentes grupos de procedencia. 80 70 60 50 40 30 20 10 0 σ: 2.91 σ: 7.49 σ: 2.91 σ: 2.91 Prom. Peso Neto (gr) PRO - VER 48.96 NAT - VER 42.87 PRO - INV 56.75 NAT - INV 39.76 Prom. Peso organos internos Prom. altura (gr) valvar (mm) 21.82 69.34 14.23 61.13 27.2 68.67 14.17 58.42 Prom. Factor de Condición (K) 14.77 17.87 17.53 19.85 47 Se muestra los datos biométricos extremos para tomar en cuenta el rango de los resultados obtenidos en cada grupo muestreado y los datos individuales extremos en cada grupo. De esta manera observamos que el animal más grande y con mayor peso fue encontrado en el grupo de animales de Ambiente natural en Verano, con respecto al caso contrario: el animal más pequeño y con menor peso fue encontrado también en el mismo grupo, es decir en Ambiente natural de Verano (Tabla 7). Tabla 7. Datos biométricos extremos (mayor y menor) de las conchas de abanico en Áncash-Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno). Grupo de conchas de abanico Mayor peso neto (gr) Menor peso neto (gr) Mayor peso órganos interno (gr) Menor peso órganos interno (gr) Mayor altura valvar (mm) Menor altura valvar (mm) Mayor FC Menor FC Verano - Producción 58.8 38.79 27.29 15.71 77 64 19.6 11.14 Verano - Ambiente natural 141.75 15.27 40.34 5.3 90 42 31.29 12.28 Invierno - Producción 78.2 40.4 42.57 17.3 78 59 24.91 12.71 Invierno - Ambiente natural 63.6 27.46 24.1 9.14 75 51 26.69 10.54 48 7.3 Observaciones Macroscópicas A nivel macroscópico se observó un número elevado de Polydora sp. en las conchas de abanico de los 4 grupos y sólo un pequeño número de conchas de abanico del grupo de Invierno – Ambiente natural presentó pequeñas manchas blanquecinas en sus órganos internos Tabla 8. Hallazgos a nivel macroscópico de las conchas de abanico en Áncash-Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno). Observaciones a nivel macroscópico Verano - Producción Verano - Ambiente natural Invierno - Producción Invierno - Ambiente natural Polydora sp. 84 90 85 90 Hydroides sp. 3 1 4 3 Perforación en las valvas 0 4 0 3 Pequeñas manchas blanquecinas en gónadas sexuales 0 0 0 3 Con relación a los porcentajes, se encontró que el 100% de las conchas de abanico que provenían de ambientes naturales presentaban Polydoras sp. independiente de la estación, en el grupo Invierno – Ambiente natural se presentaron diversos hallazgos como: presencia de Hydroides sp., perforación en las valvas y pequeñas manchas blanquecinas (Figura 11), todos con un porcentaje de presentación mínima (Figura 10). 49 Polydora sp. Hydroides sp. Perforación en las valvas Pequeñas manchas blanquecinas en gónadas sexuales 100% 84 100 % 85 3.3 % 4.4 % 1.1 % 4.4 % .3 % 3.3 % 3.3 % Verano - Producción Verano - Ambiente natural Invierno - Producción Invierno - Ambiente natural Figura 12. Porcentaje (%) de hallazgos a nivel macroscópico de las conchas de abanico en Áncash- Perú tomando en cuenta el lugar de procedencia (ambiente natural y producción), así como la temporada (verano e invierno) Figura 13. Hallazgos a nivel macroscópico. (A) Manchas blanquecinas en gónadas A B 8flechas azules). (B) Hydroides sp. encontrado en concha de abanico (Argopecten purpuratus). (C) Perforaciones en el interior de las valvas (flechas rojas). (D) Polydora sp. C D extraído de una concha de 3 50 7.4 Histopatológicos 7.4.1 Branquias Con respecto a las branquias de las conchas de abanico, se observa que en los 4 grupos la alteración más frecuente es la infiltración hemocítica y la necrosis (Figuras 13, 14, 15, 16, 18, 19, 20, 21, 22 y 23), otra alteración observada en todos los grupo fue: La presencia de ooquistes de Nematopsis sp. y los RLOs (Organismos tipo rickettsiales) (Figuras 13, 14, 15 y 16), con respecto a la presencia de estos últimos se encontró que el grupo de verano – Producción tenía la mayor prevalencia con respecto a los otros grupos. (Tabla 9, 10, 11 y 12), en este mismo grupo se observó hiperplasia del tejido branquial (Figura 13). También se encontró tremátodos en el grupo de invierno – Ambiente natural (Figura 17). Tabla 9. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADO S BRANQUIAS GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓ N Norma l Escas o Lev e Moderad o Sever o Total % Infiltración hemocítica 17 1 21 42 9 73/9 0 81.1 Nematopsis sp. 39 40 8 3 0 51/9 0 56.6 RLOs (Organismo tipo rickettsiales) 68 9 13 0 0 22/9 0 24.4 Necrosis 29 1 27 27 6 61/9 0 67.7 Hiperplasia del epitelio branquial 86 1 3 0 0 4/90 4.4 51 Tabla 10. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de ambientes naturales de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADO S BRANQUIAS GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓ N Norma l Escas o Lev e Moderad o Sever o Total % Infiltración hemocítica 7 8 21 48 6 83/9 0 92.2 RLOs (Organismo tipo rickettsiales) 77 10 3 0 0 13/9 0 14.4 Necrosis 7 12 32 36 3 83/9 0 92.2 Células vacuoladas 83 6 1 0 0 7/90 7.7 Tabla 11. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. HALLAZGOS ENCONTRADOS BRANQUIAS GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Infiltración hemocítica 19 29 19 23 0 71/90 78.8 Nematopsis sp. 89 1 0 0 0 1/90 1.1 RLOs (Organismo tipo rickettsiales) 85 5 0 0 0 5/90 5.5 Necrosis 19 34 23 14 0 71/90 78.8 52 Tabla 12. Frecuencia de alteraciones histológicas de las branquias y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de ambientes naturales de Áncash - Perú en período de invierno, HALLAZGOS ENCONTRADO S BRANQUIAS GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓ N Norma l Escas o Lev e Moderad o Sever o Total % Infiltración hemocítica 8 10 12 59 1 82/9 0 91.1 RLOs (Organismo tipo rickettsiales) 77 10 3 0 0 13/9 0 14.4 Necrosis 8 18 27 36 1 82/9 0 91.1 Nematopsis sp. 80 9 1 0 0 10/9 0 11.1 Tremátodo 87 3 0 0 0 3/90 3.3 Figura 14. Hiperplasia del epitelio branquial (Circulo negro). H&E 400X. 53 Figuras 15, 16, 17 y 18 (RLOs) Organismos tipo Rickettsiales en tejido branquial (Círculo rojo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). H&E 400X. Figura 19. Tremátodo entre los filamentos branquiales (Círculo amarillo). Áreas de necrosis del tejido (Flechas azules). Leve infiltración hemocítica (Círculo verde). H&E 400X. 54 Figura 20. Infiltración hemocítica (círculos verdes) y RLOs dentro del filamento branquial (Círculo rojo). H&E 400X. Figura 21. Infiltración hemocítica (círculos verdes), RLOs dentro del filamento branquial (Círculo rojo) y necrosis del epitelio. H&E 400X. 55 Figuras 22, 23, 24 y 25. Infiltración hemocítica (Círculos verdes). H&E 400X. 56 7.4.2 Gónada masculina Con respecto a la gónada masculina, se encontró que el porcentaje de las lesiones fue mínimo (tablas 13, 14 y 16), excepto en el grupo de Invierno - Producción, donde se observó atrofia (Figura 25) en un 15.5% (tabla 15). Otro resultado hallado fue que en los dos grupos de verano (producción y ambiente natural) se encontró necrosis e infiltración hemocítica (Figuras 24 y 26), lesiones que no fueron encontradas en los grupos de invierno. Tabla 13. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA MASCULINA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 89 0 1 0 0 1/90 1.1 Nematopsis sp. 86 4 0 0 0 4/90 4.4 Necrosis 89 0 1 0 0 1/90 1.1 Infiltración hemocítica 89 0 1 0 0 1/90 1.1 57 Tabla 14. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA MASCULINA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 87 3 0 0 0 3/90 3.3 Necrosis 86 1 3 0 0 4/90 4.4 Infiltración hemocítica 86 4 0 0 0 4/90 4.4 Tabla 15. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA MASCULINA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 76 14 0 0 0 14/90 15.5 Tabla 16. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas masculinas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA MASCULINA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 88 2 0 0 0 2/90 2.2 58 Figura 26. Infiltración hemocítica en Gónada sexual masculina (Círculo verde). H&E 400X. B A Figuras 27. Atrofia de la gónada masculina. (Se observan zonas donde no existe tejido). H&E (A) 100X y (B) 400X. 59 7.4.3 Gónada femenina En caso de la gónada femenina se observa que todos los grupos presentan atrofia (Figura 28) (tablas 17, 18, 19 y 20), donde resalta el grupo de Invierno – Producción con un porcentaje de 38.8% (tabla 19). Se observó infiltración hemocítica (Figura 27) y necrosis (Figura 29) en los dos grupos de verano (producción y ambiente natural), al mismo tiempo se encontró tremátodos (Figuras 30 y 31 ) en ambos grupos que provenían de ambiente natural (verano e invierno). Figura 28. Áreas de Necrosis (flechas azules) en Gónada masculina. H&E 400X. 60 Tabla 17. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA FEMENIDA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 87 0 3 0 0 3/90 3.3 Nematopsis sp. 86 1 3 0 0 4/90 4.4 Necrosis 89 0 1 0 0 1/90 1.1 Infiltración hemocítica 89 0 1 0 0 1/90 1.1 Tabla 18. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de verano. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA FEMENIDA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 84 5 0 1 0 6/90 6.6 Necrosis 84 1 1 4 0 6/90 6.6 Tremátodos 89 1 0 0 0 1/90 1.1 Infiltración hemocítica 86 4 0 0 0 4/90 4.4 61 Tabla 19. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros de producción de Áncash - Perú en período de invierno. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA FEMENIDA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 55 35 0 0 0 35/90 38.8 Tabla 20. Frecuencia de alteraciones histológicas de las gónadas femeninas y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de ambiente natural de Áncash - Perú en período de invierno. HALLAZGOS ENCONTRADOS GÓNADA FEMENIDA GRADO DE LESIÓN ALTERACIÓN Normal Escaso Leve Moderado Severo Total % Atrofia 89 0 1 0 0 1/90 1.1 Necrosis 88 2 0 0 0 2/90 2.2 Tremátodos 89 1 0 0 0 1/90 1.1 Nematopsis sp. 89 1 0 0 0 1/90 1.1 Figura 29. Infiltración hemocítica (Círculo verde) en gónada femenina. H&E 400X. 62 A B Figuras 30. Atrofia de la gónada masculina. (Se observan zonas donde no existe tejido). H&E (A) 100X y (B) 400X. Figura 31. Necrosis de la gónada femenina. H&E 400X. 63 Figura 32. Tremátodo (Círculo azul) y atrofia en la gónada femenina. H&E 400X. Figura 33. Tremátodo (Círculo azul) y atrofia en la gónada femenina. H&E 400X. H&E 400X. 64 7.4.4 Músculo aductor En caso del músculo aductor, todos los grupos presentaron un porcentaje considerable de necrosis (Tablas 21, 22, 23 y 24) (Figura 35). Se encontró que 28.8% de las muestras del grupo de verano- producción presentó ooquistes de Nematopsis sp. (Figuras 32, 33 y 35) (Tabla 21), se encontró células vacuoladas (Figura 34) en el grupo de verano-ambiente natural. Otro hallazgo importante fue la infiltración hemocítica (figura 35). Tabla 21. Frecuencia de alteraciones histológicas de músculo aductor y su grado de afección en Argopecten purpuratus procedente de centros d