La pirazinamida (PZA) desempeña un papel esencial en el tratamiento de la tuberculosis. Aunque la resistencia a esta droga se ha vinculado principalmente a mutaciones en el gen pncA, hasta un 30% de casos de resistencia no presentan tales alteraciones genéticas. En este estudio analizó cómo mutaciones en la metalochaperona Rv2059 podrían alterar su capacidad para activar la enzima PZAsa y con ello una posible contribución a la resistencia a la droga PZA. La metalochaperona Rv2059 tiene la capacidad de activar la metaloenzima pirazinamidasa (PZAsa), lo que sugiere un posible papel en el mecanismo de acción y resistencia a la PZA. Investigamos dos mutaciones en Rv2059 con el fin de encontrar algún efecto en su actividad de entrega de metales, una en el sitio de coordinación de metal (Glu341Gly) y otra en un lugar distante a éste (Val166Ile), utilizando ensayos con proteínas recombinantes y en la bacteria M. tuberculosis. Los resultados del primer ensayo ,usando proteínas recombinantes, confirmaron que la proteína recombinante Rv2059 Wt podía reactivar la proteína recombinante PZAsa desprovista de metales (PZAsa-Apo). Sin embargo, las proteínas mutantes Rv2059 Glu341Gly y Rv2059 Val166Ile no mostraron diferencias significativas en el proceso de reactivación en comparación con la proteína Rv2059 nativa (p=0.22 y p=0.23 respectivamente). Por otro lado, la eliminación de la metalochaperona en M. tuberculosis a través de un proceso de remoción pareció afectar la entrega de metales a la enzima PZAsa o perturbar el mecanismo de activación de la prodroga PZA, lo que resultó en resistencia, como se evidenció en los resultados de TEMA (MIC: 200 μg/ml) y en la notable reducción del flujo de POA en comparación con la cepa de referencia H37Rv (p<0.001).En cuanto a las mutantes, parecieron modificar el flujo de POA (H37Rv:Rv2059Glu341Gly (p=0.001), H37Rv:Rv2059 Val166Ile (p=0.002)), pero la concentración inhibitoria mínima (MIC) no experimentó alteraciones en comparación con la cepa de referencia H37Rv (MIC: 50 μg/ml). En resumen, nuestros hallazgos indican que la metalochaperona Rv2059 podría desempeñar un papel importante en el mecanismo de activación de la PZA, y que las mutaciones estudiadas no afectan la actividad de la metalochapeorna Rv2059 y con ello no están relacionadas con la resistencia a PZA. Este estudio contribuye al entendimiento de cómo las metalochaperonas pueden influir en los mecanismos de resistencia a las drogas y mutaciones en la mismas podrían estar viéndose compensadas por el mismo sistema para evitar la pérdida de la función de la proteína.