Objetivo: El propósito del presente estudio in vitro fue evaluar la citotoxicidad de los cementos de obturación retroapical MTA Angelus® (MTA), EndoSequence Root Repair Material® (ERRM) y Super EBA® (SEBA) en fibroblastos de ligamento periodontal humano. Materiales y métodos: Mediante un previo cultivo de fibroblastos de ligamento periodontal humano (PDLF) se evaluó la citotoxicidad de los extractos de los tres cementos de obturación retroapical de 2 y 7 días de fraguado, a diluciones seriadas, en periodos de evaluación de 1, 3 y 7 días mediante el ensayo colorimétrico MTT. El análisis estadístico con la prueba t de student, U de Mann-Whitney, ANOVA y Kruskal-Wallis se hizo con el programa SPSS 20.0. Resultados: Se determinó que el porcentaje de viabilidad celular fue superior con MTA a los 2 días de fraguado y ERRM a los 7 días de fraguado (P < 0.05) el cual fue dependiente del periodo de evaluación y diluciones. SEBA mostró la viabilidad celular más baja en comparación con MTA y ERRM en las diluciones más concentradas (P < 0.05). Conclusiones: Dentro de las limitaciones de este estudio in vitro, los cementos de obturación retroapical MTA y ERRM mostraron una alta viabilidad celular dependiente del tiempo de fraguado y periodo de evaluación en comparación con SEBA.Objective: The aim of the present in vitro study was to evaluate the cytotoxicity in human periodontal ligament fibroblasts of three root-end filling materials MTA Angelus® (MTA), EndoSequence Root Repair Material® (ERRM) and Super EBA® (SEBA). Materials and Methods: A culture of human periodontal ligament fibroblasts (PDLF) was done previously in order to evaluate the cytotoxicity of the three extracts from the root-end filling materials of 2 and 7 setting days, at serial dilutions, and evaluation periods of 1, 3, and 7 days by using the MTT colorimetric assay. Statistical analysis with t test, Mann-Whitney U test, ANOVA and Kruskal-Wallis was done with the SPSS 20.0 program. Results: It was found that the percentage of cell viability of MTA was superior in 2 setting days and for ERRM was superior in 7 setting days (P < 0.05), which was dependent of evaluation period and dilutions. SEBA showed the lower percentage of cell viability compared with MTA and ERRM in higher concentrated dilutions (P < 0.05). Conclusions: Within the limitations of this in vitro study, MTA y ERRM root-end fillings showed higher cell viability, dependent of evaluation period and dilutions, compared with SEBA.