Efecto de eflujo del ácido pirazinoico por medio del silenciamiento de genes homólogos por CRISPRi en bombas de eflujo de Mycobacterium tuberculosis en el modelo de Mycobacterium smegmatis

Obando Ballardo, Kevin Rogger

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Tecnología Médica en la Especialidad de Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica
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dc.contributor.advisor	Agapito Panta, Juan Carlos	es_ES
dc.contributor.advisor	Sheen Cortavarria, Patricia	es_ES
dc.contributor.author	Obando Ballardo, Kevin Rogger	es_ES
dc.date.accessioned	2026-02-27T20:27:44Z
dc.date.available	2026-02-27T20:27:44Z
dc.date.issued	2025
dc.identifier.other	211091	es_ES
dc.identifier.uri	https://hdl.handle.net/20.500.12866/18325
dc.description.abstract	La pirazinamida (PZA) es un fármaco esencial en el tratamiento de la tuberculosis por su capacidad de reducir la duración terapéutica. Su metabolito activo, el ácido pirazinoico (POA), puede ser expulsado por bombas de eflujo bacterianas, lo que representa un posible mecanismo alternativo de resistencia en cepas sin mutaciones en pncA. En este estudio, se evaluó el papel funcional de genes homólogos a bombas de eflujo de Mycobacterium tuberculosis en Mycobacterium smegmatis mediante silenciamiento génico por CRISPRi. Se diseñaron y validaron ARNg dirigidos a los genes MSMEG_0232, MSMEG_0241, MSMEG_5046 y MSMEG_6331, utilizando criterios de eficiencia teórica de represión y modelos predictivos de silenciamiento. Además, se midió la expresión relativa de ARNm mediante qPCR, y se evaluó la velocidad de eflujo de POA utilizando el test de Wayne cuantitativo normalizado por proteínas (Bradford). Los datos obtenidos fueron analizados mediante regresión lineal múltiple en R Studio. Los resultados mostraron que MSMEG_0232 actúa directamente en el eflujo de POA, mientras que MSMEG_5046 y MSMEG_6331 presentaron respuestas variables posiblemente asociadas a rutas compensatorias. En cambio, MSMEG_0241 no presentó un impacto fenotípico significativo. Este hallazgo demuestra que el silenciamiento dirigido puede utilizarse para caracterizar bombas de eflujo relevantes en la resistencia a PZA, y propone nuevos blancos terapéuticos preliminares que podrían ser explorados en futuros estudios en M. tuberculosis	es_ES
dc.description.abstract	Pyrazinamide (PZA) is an essential drug in tuberculosis treatment due to its ability to shorten the duration of therapy. Its active metabolite, pyrazinoic acid (POA), can be expelled by bacterial efflux pumps, representing a potential alternative mechanism of resistance in strains lacking mutations in pncA. In this study, the functional role of efflux pump homologs from Mycobacterium tuberculosis was evaluated in Mycobacterium smegmatis through gene silencing using CRISPR interference (CRISPRi). Single-guide RNAs (sgRNAs) were designed and validated for the genes MSMEG_0232, MSMEG_0241, MSMEG_5046, and MSMEG_6331, using theoretical repression efficiency criteria and predictive silencing models. Additionally, relative mRNA expression was quantified by qPCR, and POA efflux rate was assessed using the quantitative Wayne assay normalized by protein content (Bradford). Data were analyzed using multiple linear regression in R Studio. Results showed that MSMEG_0232 plays a direct role in POA efflux, while MSMEG_5046 and MSMEG_6331 exhibited variable responses, possibly linked to compensatory pathways. In contrast, MSMEG_0241 showed no significant phenotypic impact. These findings demonstrate that targeted gene silencing can be employed to functionally characterize efflux pumps involved in PZA resistance and identify novel preliminary therapeutic targets for future studies in M. tuberculosis.	es_ES
dc.format	application/pdf	es_ES
dc.language.iso	spa	es_ES
dc.publisher	Universidad Peruana Cayetano Heredia	es_ES
dc.rights	info:eu-repo/semantics/openAccess	es_ES
dc.rights.uri	https://creativecommons.org/licenses/by-nc-nd/4.0/deed.es	es_ES
dc.subject	Mycobacterium smegmatis	es_ES
dc.subject	Pirazinamida	es_ES
dc.subject	Ácido pirazinoico	es_ES
dc.subject	CRISPRi	es_ES
dc.subject	Bombas de eflujo	es_ES
dc.subject	Resistencia.	es_ES
dc.title	Efecto de eflujo del ácido pirazinoico por medio del silenciamiento de genes homólogos por CRISPRi en bombas de eflujo de Mycobacterium tuberculosis en el modelo de Mycobacterium smegmatis	es_ES
dc.title.alternative	Efflux effect of pyrazinoic acid through homologous gene silencing by CRISPRi in efflux pumps of Mycobacterium tuberculosis using the Mycobacterium smegmatis model	es_ES
dc.type	info:eu-repo/semantics/bachelorThesis	es_ES
thesis.degree.name	Licenciado en Tecnología Médica en la Especialidad de Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica	es_ES
thesis.degree.grantor	Universidad Peruana Cayetano Heredia. Facultad de Medicina Alberto Hurtado. Escuela de Tecnología Médica	es_ES
thesis.degree.discipline	Tecnología Médica en la Especialidad de Laboratorio Clínico y Anatomía Patológica	es_ES
dc.publisher.country	PE	es_ES
dc.subject.ocde	https://purl.org/pe-repo/ocde/ford#3.04.03	es_ES
renati.author.dni	74711183
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0001-9134-7322	es_ES
renati.advisor.orcid	https://orcid.org/0000-0002-7118-9301	es_ES
renati.advisor.dni	17520490
renati.advisor.dni	09541127
renati.type	https://purl.org/pe-repo/renati/type#tesis	es_ES
renati.level	https://purl.org/pe-repo/renati/level#tituloProfesional	es_ES
renati.discipline	915126	es_ES
renati.juror	Loyola Sosa, Steev Orlando	es_ES
renati.juror	Aliaga Navarro, Rocio Marlene	es_ES
renati.juror	Cuicapuza Arteaga, Diego Bernhard	es_ES