Objective: The objective of the present study was to evaluate the antibacterial effect of Peruvian propolis and the action of a methanolic fraction on an in vitro biofilm of Streptococcus gordonii ATCC® 51656™ and Fusobacterium nucleatum ATCC® 10953™. Materials and Methods: Through sequence experiments, 13 propolis from the Peruvian Andes were collected and evaluated by measuring their antibacterial effect on S. gordonii and F. nucleatum strains through inhibition halos. Chlorhexidine and DMSO were used as controls. Organic raw extracts, partitions and propolis fractions were evaluated; besides, it was evaluated propolis cytotoxicity on HGF-1-ATCC CRL-2014 cell lines through colorimetric techniques of 3-(4.5-dimethylthiazole-2-yl) -2.5-diphenyltetrazolium bromide (MTT) and optical density. Finally, the effect of propolis on biofilm was evaluated by confocal microscopy and PCR. Results: It was found that Oxapampa's propolis sample presented antibacterial effect on both strains studied, in raw extracts, chloroformic partitions, butanolic and methanolic fraction. The minimum inhibitory concentration of 0.78 mg/mL of the methanolic fraction of the chloroformic residue of Oxapampa propolis was not toxic on gingival fibroblasts. Concentrations of 0.78 mg/mL and 1,563 mg/mL of the methanolic fraction of the chloroformic residue of propolis from Oxapampa influenced biofilm thickness and copy number of the srtA gene of S. gordonii and radD gene of F. nucleatum at 120 hours, Conclusion: Of the 13 Peruvian propolis, it was found that the methanolic fraction of the chloroformic residue of Oxapampa propolis presented an antibacterial effect on S. gordonii and F. nucleatum and effect on the thickness of the biofilm created in vitro.Objetivo: El objetivo del presente estudio fue evaluar el efecto antibacteriano de propóleos peruanos y acción de una fracción metanólica sobre un biofilm in vitro de Streptococcus gordonii ATCC® 51656™ y Fusobacterium nucleatum ATCC® 10953™.. Materiales y métodos: Mediante experimentos en secuencia se recolectaron y evaluaron 13 propóleos del ande peruano midiendo su efecto antibacteriano sobre cepas de S. gordonii y F. nucleatum a través de halos de inhibición. Se usó como controles a la Clorhexidina y DMSO. Se evaluaron los extractos brutos orgánicos, particiones y fracciones de propóleos; además se evaluó la citotoxicidad de los propóleos sobre líneas celulares HGF-1-ATCC CRL-2014 mediante técnicas colorimétricas de 3-(4.5-dimeltiltiazol-2-yl) -2.5-difeniltetrazolio bromuro (MTT) y densidad óptica. Finalmente se evaluó el efecto de los propóleos sobre el biofilm mediante microscopia confocal y PCR. Resultados: Se encontró que la muestra de propóleo de Oxapampa presentó efecto antibacteriano sobre ambas cepas estudiadas tanto en los extractos brutos, particiones clorofórmicas, butanólicos y fracción metanólica. La concentración mínima inhibitoria de 0.78 mg/mL de la fracción metanólica del residuo clorofórmico del propóleo de Oxapampa no fue tóxica sobre fibroblastos gingivales. Las concentraciones de 0.78 mg/mL y 1.563 mg/mL. de la fracción metanólica del residuo clorofórmico del propóleos de Oxapampa presentaron efecto sobre el espesor del biofilm y el número de copias del gen srtA de S. gordonii y gen radD de F. nucleatum a las 120 horas, Conclusión: De los 13 propóleos peruanos, se encontró que la fracción metanólica del residuo clorofórmico del propóleo de Oxapampa presentó efecto antibacteriano sobre S. gordonii y F. nucleatum y efecto sobre el espesor del biofilm creado in vitro.